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发布时间：2024/1/12 10:38:40 阅读次数：178
如何选择细胞培养基？培养基 是培养环境中最重要的组成部分，因为它为细胞生长提供了必要的营养、生长因子和激素，并调节培养物的pH值和渗透压。尽管最初的细胞培养实验使用从组织提取物和体液中获得的天然培养基进行，但对标准化和培养基质量的需求不断增长，促进了化学成分确定的培养基的发展。
细胞培养步骤
a、细胞传代：如果未超过80%汇合度时，将瓶装的完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；如果细胞密度超80%，即可进行传代培养，传代具体步骤如下：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加1-2ml消化液（0.25%胰蛋白酶-0.53mM EDTA）至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上完全培养基终止消化。
3.轻轻吹打细胞，使之完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1：2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入到37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。
b、细胞冻存：
1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；
2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心 5min；
3、 弃上清，沉淀细胞加入1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中。
4、 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱即可，如后期要将细胞转入液氮罐中，则需在-80℃冰箱 中存放24小时以上再转入液氮罐中。
C、细胞复苏：
1、从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速将其置入 37℃水浴中解冻， 直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；
2、将冻存管中的细胞移至含 5ml 完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min；
3、弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养；
4、第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。
注意事项：有些细胞贴壁不牢，在运输过程中容易发生细胞脱落，这是正常现象。可按此方法：将培养瓶所有培养液收集至离心管，1000rpm离心5min，收集上清作过渡培养（后期对比培养），沉淀加入胰酶1-2ml，轻轻吹打，重悬，消化1-2分钟后，加5ml完全培养基终止反应。再离心，弃上清，加1-2ml完全培养基重悬。然后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养。 如何选择细胞培养基？
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