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发布时间：2024/3/20 9:18:01 阅读次数：107
【产品名称】
通用名称： HPV 假病毒
【包装规格】
15μl /30μl /50μl /100μl/管
【预期用途】
用于体外检测血清、单抗等样品的 HPV 中和抗体滴度。
【检验原理】
中和抗体能在体外与 HPV 假病毒中和，使得部分假病毒丧失感染细胞的能力，进入细胞的假 病毒会表达 eGFP、RFP 和 E2-Crimson 等荧光报告基因蛋白。通过酶联免疫斑点分析仪读取并计算 每孔的荧光斑点数， 将待测样品孔的荧光斑点数与假病毒对照组的荧光斑点数进行比较， 可计算待
测样品孔的抑制病毒百分比。
通过计算公式可以计算出当 50%假病毒被抑制时待测样品的稀释倍数，即 ID50（Inhibition dilution），用 ID50 来表示待测样品对假病毒的中和活性。 ID50 值越大，抗体中和活性越高。若样品
有具体浓度，可计算 50%假病毒被抑制时待测样品的浓度，即 EC50 ，EC50=样品浓度/ ID50。
【主要组成成分】
HPV 假病毒颗粒， L1 、L2 蛋白，报告基因
【储存条件及有效期】
-80℃ 密封贮存。有效期： 12 个月。
避免反复冻融。
生产日期及有效期详见标签。
【操作要求】
该产品为 HPV 假病毒，中和实验操作需在生物安全柜中进行。
【检测仪器要求】
若进行中和抗体检测实验， 需采用可进行荧光斑点计数的仪器， 如 Cellular Technology Limited
（CTL）-酶联免疫斑点分析仪等。
荧光显微镜： 仅能观察到绿色荧光蛋白 eGFP 及红色荧光蛋白 RFP，且不可计数， 不推荐使用。
【必需实验材料要求】
细胞： HEK 293FT 细胞，无其他推荐的替代细胞。若采用其他细胞，客户需自行进行方法学
的建立及验证。
HPV假病毒中和抗体实验说明书
【使用方法】
1. 提前预铺细胞： 提前 2-6 小时将 HEK 293FT 细胞消化， 以一定数量（建议细胞数： 1.5×104/孔）
加入 96 孔透明平底无菌细胞培养板中。
2. 待测样品系列稀释：在 96 孔无菌细胞培养板中，将待测样品进行系列稀释。 具体板子布局参
见图 1。
3. 病毒稀释： 本产品为假病毒母液， 客户依据报告中假病毒的滴度进行稀释使用（1TCID50=1 荧
光斑点）。
4. 待测样品与病毒混合孵育： 将系列稀释后的待测样品与稀释后的假病毒溶液混合（推荐体积比
1:1），4℃~8℃条件下孵育 1 小时。
5. 孵育结束后，将上述混合液与提前预铺的细胞进行混合。
6. 将细胞培养板置于 37℃、5% CO2 的细胞培养箱中继续培养 60 ~96 小时。
7. 使用 ELISPOT 酶联免疫斑点分析仪进行检测，计算感染抑制率（%）。
感染抑制率（%）=1-（样本检测值-细胞对照值） /（病毒对照值-细胞对照值） ×100%。
8. 客户根据自定标准进行 ID50 计算（推荐使用 Reed-Muench 法）。
【实验设计注意事项】
1. 中和实验过程中必须设置细胞对照和病毒对照（见图 1）。
2. 中和实验过程中需要设置阴性内控品及阳性内控品（客户自备）来判断实验是否成立。
【产品性能指标】
外观应满足如下要求：包装完整，无破损，文字符号标识清晰。
【产品使用注意事项】
1. 本产品仅供中和抗体体外检测使用。
2. 因细胞水平的中和抗体检测受细胞类型、细胞培养状态、环境条件等影响较大，客户需根据自
身实验室条件确定细胞量、病毒加入量等中和实验参数。
3. 本产品报告仅提供假病毒滴度。
4. 减少反复冻融，少量使用时建议分装储存。
5. 流水或 4℃融化使用。
6. 无菌操作。
7. 本产品不能扩增传代。
8. 本产品无致病性，不会造成细胞病变及病理改变。
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