为了得到更好的实验结果,一些ELISA试剂盒实验新手们还需多加了解技术内容,公司每周都会为您精心整理出重点技术要领,能够熟练的掌握好这些之后再应用到实验里面就会简单的多.今天的主要内容是入了ELISA的门,这些技术点你得知道.
样本加样方法
1 细胞上清：前处理必须是细胞离心去除,每孔直接加100μl即可.如果浓度太高需稀释时,用标准品稀释液直接稀释.
2 脑脊液：前处理必须是细胞离心去除,每孔直接加100μl即可.如果浓度太高需稀释时,用标准品稀释液直接稀释.
3 血清血浆：请加入50ul样本分析缓冲液后加50ul标本,如稀释量大,请将样本与样本分析缓冲液等量加入,不足部分用标准品稀释液补充至100ul.
A.血清标本应是自然凝固后,取上清,避免在冰箱中凝固血液；
B.血浆标本,推荐用EDTA的方法收集若待测样本不能及时检测,标本收集后请分装,冻存于－20℃,避免反复冻融.
C.血清标本不应添加任何防腐剂或抗凝剂；
D.标本应清澈透明,检测前样本中如有悬浮物应通过离心去除.
E.请勿使用溶血,高血脂或污染的标本检测,否则结果将不准确.
4 组织匀浆液的样本,要制备过程中需要在缓冲液中加入蛋白酶抑制剂,防止蛋白成份被内源性蛋白酶降解,造成检测结果的值偏低.
因组织匀浆液的样本蛋白种类多,含量丰富,实验参照血清血浆标本的处理方法进行,否则就会影响实验结果.具体是加入50ul样本分析缓冲液后加50ul标本,需稀释时,请将样本与样本分析缓冲液等量加入,不足部分用标准品稀释液补充至100ul.
因为目标蛋白不同,可能造成降解的蛋白类型可能不一样,如果实验前通过文献确定用哪种蛋白酶抑制剂,有针对性加入,可节省抑制剂.如果查不到相关文献,可采用组合抑制的办法确保蛋白不易被降解.
