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发布时间：2020/9/30 11:24:04 阅读次数：1749
LMH鸡肝癌细胞
培养说明书
一 细胞培养条件
| 英文名称 | LMH | 中文名称 | 鸡肝癌细胞 |
| 生长特性 | 贴壁生长 | 冻存条件 | 无血清冻存液 |
| 培养体系 | DMEM/F12+10%特级FBS,细胞贴壁性差,补液的时候不要冲刷到细胞层,2-3天换液,90%以上汇合度传代,传代比例1：3-1：6,每隔2-3天传代 | ||
| 传代方法 | 第一次建议1:2传代 | 传代情况 | 2天换液 |
| 备注 | 用无菌离心管收集瓶子培养基,留作过渡培养 | ||
二 细胞收到后处理
细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的最好办法.收到细胞回到自己的实验室后,先打开外包装,用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内,严格无菌操作,培养箱静置2-4小时.镜下观察：未超过80%汇合度时,可将瓶装的完全培养液收集至离心管中,加入6ml完全培养基,放入37℃ 5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时,根据情况传代或者冻存,具体操作见细胞培养步骤.（注意发货的是密封培养瓶的话,放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松）
三 细胞培养步骤
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入5mL培养基混合均匀.在1000RPM条件下离心5分钟,弃去上清液,补加4-6mL完全培养基后吹匀.然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中）,培养过夜.第二天换液并检查细胞密度.
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养.
1 对于贴壁细胞,传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清,用不含钙 镁离子的PBS润洗细胞1-2次.
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2min,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化.
3.轻轻吹打细胞,完全脱落后吸出,在1000RPM条件下离心8-10分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀.
4. 按5-6ml/瓶补加培养液,将细胞悬液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中.
PS：若客户收到2ml小管细胞,收到细胞后,用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内,严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿,加入5ml左右完全培养基混匀,放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%,换液继续培养,视情况传代或者冻存.若密度超过80%,可直接进行传代（方法同上）.
3）细胞冻存：
1 细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃25cm2培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次；2 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化,轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中,1000rpm离心5min；
3 用适量的冻存液重悬细胞,并放置于冻存管中；
4 先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h,然后将其移入-80℃.
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