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全蛋白提取试剂盒

发布时间:2020/10/21 17:17:52      阅读次数:42

 全蛋白提取试剂盒

 

有效期:1 年.

产品组成:


名称

50T

100T

储存条件

裂解液(强)

50 ml

100 ml

2-8

磷酸酶抑制剂(100×)

0.5ml

1ml

 

-20

蛋白酶抑制剂(100×)

0.5ml

1ml

PMSF100×)

0.5ml

1ml

 

产品说明:

本试剂盒用于哺乳动物组织和细胞中提取总蛋白,试剂盒中的裂解液含有蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂,作用较为强烈,可快速获得总蛋白,可用于免疫印迹实验等基础研究实验,由于含有上述的酶抑制剂,不能用于研究蛋白激酶和磷酸激酶的研究.本品仅用于科研.

操作方法:

1 组织总蛋白的提取

1)  1ml 的冷裂解液中各加入 10ul 的磷酸酶抑制剂 蛋白酶抑制剂和 PMSF;混匀,放置在冰上备用;

2) 称取 0.1g 的新鲜组织,放置于玻璃匀浆器的入口缓冲处,用眼科剪将组织块尽可能的剪碎,然后加入 0.5-1ml 的新配置的裂解液,研磨直至没有明显的组织块,这个过程注意冰上操作;

3) 将组织匀浆液移入 1.5ml EP 管中,4 12000g 离心 30min

4) 吸取上清至新的管中;

5) 进行蛋白定量或者变性进行蛋白实验.

(提取好的蛋白建议保存于-80℃,即用即取,避免反复冻融,避免长时间储存.)

2 细胞总蛋白的提取

1) 裂解液的用量:107 个细胞需要裂解液 1ml

2) 贴壁细胞:弃去培养基,用冷的 PBS 洗两次,弃去 PBS,然后加入计算好的细胞裂解液;在冰上用细胞刮刀进行刮离细胞,将刮离的细胞裂解液移入 EP 管中,颠倒裂解 20-30min.

3) 悬浮细胞:4400g 离心收集细胞,用冷的 PBS 洗两次细胞,同样按细胞数加入裂解液,涡旋

10s,放置冰上裂解 10min,重复 3-4 次;

 全蛋白提取试剂盒裂解完毕之后,将细胞裂解液 4 12000g 离心 30min

5) 将上清移入新的 EP 管中;进行蛋白定量或者变性进行蛋白实验.

(提取好的蛋白建议保存于-80℃,即用即取,避免反复冻融,避免长时间储存.)

注意事项:

1. 实验过程,所有试剂都要需要预冷或者即融,保证操作过程中的低温环境.

2. PSMF(有毒)现用现加,因为 PMSF 在水溶液中会快速降解.

  全蛋白提取试剂盒


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