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发布时间：2020/10/21 17:18:41 阅读次数：1341
动物组织/细胞总蛋白提取试剂盒（柱式法）
规格：50T
保存：RT,1 年
应用：可用于动物细胞和组织的总蛋白样品制备,适用于 SDS-PAGE,WB 等下游应用
| 组份 | 规格 |
| 变性细胞裂解液 | 25mL |
| 离心管柱 | 50 个 |
| 收集管 | 50 个 |
| 塑料研磨棒 | 2 根 |
产品说明：
动物细胞/组织总蛋白提取试剂盒,是新一代超快速蛋白质提取工具.越来越多的证据表明最常用的 RIPA 缓冲液可能导致蛋白质的随机损失,产生很多难以解释的疑难数据.本试剂盒使用离心管柱提取技术结合优化的裂解缓冲液可以更快速 更有效地提取总蛋白,使 WB 结果更加准确.使用离心管柱提取蛋白,提取体系最低可以低至 20μL,有效的解决了小样本量的样本.
知识点：
1. 蛋白酶抑制剂不是必须加入,但是如果下游实验需要较长时间或者蛋白提取后保存较长时间, 建议添加蛋白酶抑制剂.推荐使用 BCA 试剂盒用于蛋白浓度测定.研究蛋白磷酸化,磷酸酶抑制剂应在使用前加入裂解缓冲液.
2. 做 WB 上样前,仍需和 loading buffer 混匀煮制样品.
细胞样品总蛋白提取
A. 非贴壁细胞
1. 将离心管柱及接收管套管放在冰上预冷.
2. 低速离心收集细胞,在 1.5ml 离心管中加入预冷的 PBS,旋窝震荡,500g 离心 2-3 分钟清洗细胞.吸去上清,剩余与细胞体积相同体积的 PBS.涡旋震荡重悬细胞.
3. 加入表格 1 中相应体积的细胞裂解液,涡旋震荡裂解细胞.（细胞数量和裂解液须保证对应关系,以达到最佳提取效率）请注意：部分未完全裂解的细胞不会影响样品质量.
4. 将裂解的细胞转移到预冷的离心管柱套管中,14000-16000g 离心 30 秒取出.
5. 立刻将收集管放置于冰上,弃去离心管柱,蛋白提取完成可应用于下游实验.
表 1. 不同细胞体积应加入相应体积裂解液
| 细胞体积（μL） | 裂解液（μL） | 相当细胞量 X 106 |
| 3 | 20 | 0.3 |
| 5 | 50 | 0.5 |
| 10 | 100 | 1 |
| 20 | 200 | 2 |
| 40 | 500 | 3 |
1. 将离心管柱及接收管套管放在冰上预冷
2. 将预冷的 PBS 直接加入培养板,培养皿或培养瓶中清洗贴壁细胞,吸去上清.
3. 按照表 2 中将相应体积的细胞裂解液均匀的加入整个器皿表面,用移液器吹打几次,将裂解的细胞转移到预冷的离心管柱套管中,14000-16000g 离心 30 秒取出.（如提取浓度不佳,可减少裂解液使用量）
4. 
立刻将收集管放置于冰上,弃去离心管柱,蛋白提取完成可应用于下游实验.表格 2. 不同贴壁细胞量应加入相应体积裂解液
以下步骤是从 15-20mg 组织中提取.如果起始量较大或者较小,需调整相应裂解液的用量比例.
1. 将离心管柱及接收管套管放在冰上预冷
2. 将 15-20mg 组织放置于离心管柱上,用塑料棍扭转研磨 50-60 次,加入 200μL 细胞裂解液, 继续研磨 30-60 次.（组织用量不要过量,无需过度研磨,裂解液可分两次加入以得到最佳效果）
注意：塑料研磨棒可以重复使用,用蒸馏水彻底冲洗干净,用纸巾擦干.
3. 盖上盖子室温孵育 1-2 分钟,14000-16000g 离心 1-2 分钟取出.收集管里的上清是抽提的变性总蛋白.
请注意：部分未完全裂解的组织不会影响样品质量.
| 问题 | 解决方案 |
| 裂解物太粘稠,无法用 200-1000µL 吸头吹打 | 将细胞裂解物倒入离心管柱中或将吸头剪掉尖端 |
| 离心 30 秒后离心管中还存留细胞裂解液 | 减少起始细胞/组织的数量或增加细胞裂解液 |
| 低蛋白浓度 | 增加起始细胞/组织的数量或减少细胞裂解液量 |
| 高分子量范围（100-300KDa）蛋白条带弱 | 增加细胞裂解液确保细胞/组织裂解充分 |
动物组织/细胞总蛋白提取试剂盒
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