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1-3-β-D葡聚糖(1,3-β-DG)酶联免疫分析(ELISA试剂盒使用说明书

发布时间:2023/7/14 8:53:25      阅读次数:403

 1-3-β-D葡聚糖(1,3-β-DG)酶联免疫分析(ELISA试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用.

使用目的:

本试剂盒用于测定血清,血浆及相关液体样本中1-3-β-D葡聚糖(1,3-β-DG)的含量.

实验原理

本试剂盒应用酶联免疫竞争法测定标本1-3-β-D葡聚糖(1,3-β-DG)水平.用纯化的1-3-β-D葡聚糖(1,3-β-DG)抗体包被微孔板,制成固相体,往包被单抗的微孔中加入1-3-β-D葡聚糖(1,3-β-DG),和HRP标记的1-3-β-D葡聚糖(1,3-β-DG)抗原,使它们竞争结合,,经过彻底洗涤后底物TMB显色.样本颜色的深浅和样品中的1-3-β-D葡聚糖(1,3-β-DG)的含量相关.用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品1-3-β-D葡聚糖(1,3-β-DG)的含量.  

试剂盒组成

1

30倍浓缩洗涤液

20ml×1

 

 

8

标准品S11600pg/ml

0.5ml×1

2

酶标试剂

6ml×1

标准品S2800pg/ml

0.5ml×1

3

酶标包被板

12×8

标准品S3400pg/ml

0.5ml×1

4

显色剂A

6ml×1

标准品S4200pg/ml

0.5ml×1

5

显色剂B

6ml×1

标准品S5100pg/ml

0.5ml×1  

6

终止液

6ml×1/

9

说明书

1

7

样品稀释液

6ml×1/

10

封板膜

2

 

标本要求 

1.标本处理:(1)水样   采集后经 -20℃反复冻融三次,再经玻璃纤维过滤后,备查

2)组织   样品用丁醇:甲醇:水(52570 V:V:V)抽提,或按相关文献提取进行,提取后应尽快进行实验.若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,备查

2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性.

操作步骤

 

1. 加样:分别设标准孔 空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同) 待测样品孔.在酶标包被板上标准孔中加50微升,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍).加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀.

2. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外.

3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育60分钟.   

4. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干.

6. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.

7. 终止:每孔加终止50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色).

8. 测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值). 测定应在加终止液后15分钟以内进行.

 

计算

  以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度.

注意事项

1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存.

2浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果.

3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差.一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样.

4. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔.如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5).

5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染.

6.底物请避光保存.

7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理.

9.本试剂不同批号组分不得混用.

检测范围:

30pg/ml-1800pg/ml

规格:

96/

保存条件及有效期

1试剂盒保存:2-8.

2.有效期:6个月


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