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发布时间：2023/7/14 8:53:25 阅读次数：698
1-3-β-D葡聚糖（1,3-β-DG）酶联免疫分析（ELISA试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用.
使用目的：
本试剂盒用于测定血清,血浆及相关液体样本中1-3-β-D葡聚糖（1,3-β-DG）的含量.
实验原理
本试剂盒应用酶联免疫竞争法测定标本中1-3-β-D葡聚糖（1,3-β-DG）水平.用纯化的1-3-β-D葡聚糖（1,3-β-DG）抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中加入1-3-β-D葡聚糖（1,3-β-DG）,和HRP标记的1-3-β-D葡聚糖（1,3-β-DG）抗原,使它们竞争结合,,经过彻底洗涤后加底物TMB显色.样本颜色的深浅和样品中的1-3-β-D葡聚糖（1,3-β-DG）的含量呈负相关.用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值）,通过标准曲线计算样品中1-3-β-D葡聚糖（1,3-β-DG）的含量.
试剂盒组成
| 1 | 30倍浓缩洗涤液 | 20ml×1瓶 |
8 | 标准品S1（1600pg/ml） | 0.5ml×1瓶 |
| 2 | 酶标试剂 | 6ml×1瓶 | 标准品S2（800pg/ml） | 0.5ml×1瓶 | |
| 3 | 酶标包被板 | 12孔×8条 | 标准品S3（400pg/ml） | 0.5ml×1瓶 | |
| 4 | 显色剂A液 | 6ml×1瓶 | 标准品S4（200pg/ml） | 0.5ml×1瓶 | |
| 5 | 显色剂B液 | 6ml×1瓶 | 标准品S5（100pg/ml） | 0.5ml×1瓶 | |
| 6 | 终止液 | 6ml×1/瓶 | 9 | 说明书 | 1份 |
| 7 | 样品稀释液 | 6ml×1/瓶 | 10 | 封板膜 | 2张 |
标本要求
1．标本处理：（1）水样 采集后经 -20℃反复冻融三次,再经玻璃纤维过滤后,备查
（2）组织 样品用丁醇：甲醇：水（5：25：70 V：V：V）抽提,或按相关文献提取进行,提取后应尽快进行实验.若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,备查
2．不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性.
操作步骤
1. 加样：分别设标准孔 空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同） 待测样品孔.在酶标包被板上标准孔中加50微升,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）.加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀.
2. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外.
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育60分钟.
4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干.
6. 显色：每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
7. 终止：每孔加终止液50μl,终止反应（此时蓝色立转黄色）.
8. 测定：以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）. 测定应在加终止液后15分钟以内进行.
计算
以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度.
注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存.
2．浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果.
3．各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差.一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样.
4． 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔.如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值）,请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）.
5． 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染.
6．底物请避光保存.
7．严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理.
9．本试剂不同批号组分不得混用.
检测范围：
30pg/ml-1800pg/ml
规格：
96人份/盒
保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃.
2．有效期：6个月
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