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人转移胰腺腺癌细胞吉西他滨耐药株(ASPC-1/GEM)

发布时间:2024/7/1 9:44:15      阅读次数:30

 人转移胰腺腺癌细胞吉西他滨耐药株ASPC-1/GEM                             

细胞介绍

一个胰腺癌病人的腹水中的细胞移植到裸鼠后建立了这个细胞株.

细胞特性

1) 来源ASPC-1耐药筛选

2) 形态:上皮细胞样,贴壁生长

3) 含量:>1×106  细胞数             

4) 用途:仅供科研使用

细胞运输 保存及注意事项

 

复苏细胞

冻存细胞

包装

充液的T25细胞培养瓶

1mL冻存管

运输条件

常温

干冰

保存方式

75%酒精消毒瓶壁,置于37恒温细胞培养箱

-80℃冰箱中保存过夜后转入液氮/立即复苏

注意事项

1. 收到细胞请先就培养瓶/冻存管的外观 细胞的状态,进行拍照并保存,如有问题请及时联系我们;

2. 收到的复苏细胞,若有较多细胞飘起,可能由于运输导致.请先置于37℃细胞培养箱中静置2~4h,待细胞贴壁后再做处理;

3. 复苏细胞充液培养基为不含药物的维持培养基,收到细胞后请及时更换为完全培养基;

4. 建议收到细胞后,首先进行扩增,并冻存部分细胞以备用.

细胞耐药诱导过程

待细胞生长稳定后,开始倍增药物诱导剂量,每个剂量保持至细胞可以稳定生长至汇合度达50%以上.递增药物浓度依次为:0.03μg/mL 0.3μg/mL 1.5μg/mL 3μg/mL 6μg/mL 12μg/mL 18μg/mL.约10个月后,细胞可在18μg/mL GEM药物浓度下稳定生长,视为耐药细胞株构建成功,并命名为ASPC-1/GEM.

细胞培养试剂的配制

1)GEM药物的配制及保存

建议将GEM药物配制成18mg/mL的母液:即使用1mL DMSO溶液溶解18mg GEM药物,使其完全溶解.

注意:可根据用量配置药物,并将药物分装保存,避免反复冻融导致药物失效.溶解后的GEM,4℃保存1周,-20℃保存1个月,-80℃保存6个月.

2)冻存液的配制

90%优质胎牛血清+10%DMSO,现用现配.

3)完全培养基的配制(推荐使用h005-001b

成分

体积/浓度

优质胎牛血清

10%

双抗

1%

GlutaMAX-1谷氨酰胺

1%

GEM

0~18μg/mL

DMEM培养基

补充至所需体积

细胞培养条件

气相:空气,95%;二氧化碳,5%;温度:37℃,培养箱湿度为70%~80%.

细胞处理

1冻存细胞的复苏

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4~6mL完全培养基的离心管中混合均匀,1000rpm/min离心3~5min,弃去上清液.加入1mL完全培养基重悬细胞后,均匀铺于6~8mL完全培养基的培养瓶(或皿)中,置于37恒温细胞培养箱中过夜培养.第二天显微镜下观察细胞生长情况,2~3day换液.

注意:细胞复苏过程中,不可使用含有药物的培养基.须在细胞完全贴壁,形态完全展开,生长状态稳定后,方可根据实验需要添加GEM药物.加药后细胞生长状态较为缓慢,可适当降低GEM的浓度,或使用不含GEM的完全培养基培养至细胞生长状态较好时,再更换为所需的GEM浓度

②建议复苏细胞时始终穿戴防护手套和面罩,避免冻存管因温差较大而发生爆炸,造成人员伤害.

2)细胞传代(建议以同等底面积的培养瓶/皿按照12比例传代)

细胞密度80%~90%,可进行传代培养.

弃去培养上清,用不含钙 镁离子PBS润洗细胞1,吸净残余的PBS.

加入适当体积的0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA培养瓶中T25-1mL,其它培养器皿可覆盖培养底面即可,置于37培养箱中消化2~5min,显微镜下观察细胞细胞大部分变圆并脱落,即可轻拍培养瓶使细胞全部脱落.迅速拿回操作台,加入2倍体积的 10%FBS的培养基中止消化. 

将细胞悬液移入离心管中,1000rpm/min离心5min,弃去上清液.

⑤向细胞沉淀中加入1~2mL完全培养基重悬细胞,轻吹混匀.将细胞悬液按11的比例均匀铺于2的培养/中,添加6~8mL完全培养基,置于37恒温细胞培养箱中培养.第二天显微镜下观察细胞生长情况,2~3day换液.

注意:细胞传代过程中,不可使用含有药物的培养基.须在细胞完全贴壁,形态完全展开,生长状态稳定后,方可根据实验需要添加GEM药物.加药后细胞生长状态较为缓慢,可适当降低GEM的浓度,或使用不含GEM的完全培养基培养至细胞生长状态较好时,再更换为所需的GEM浓度.

3)细胞冻存

细胞冻存时,步骤同2)细胞传代的~④,细胞计数后,加入配制好的细胞冻存液,重悬细胞,1×106 ~ 1×107个细胞/mL分配到一个冻存管中,标注好名称 代数 日期等信息.

将要冻存的细胞置于程序降温盒中,-80冰箱中过夜,之后转入液氮容器中储存.同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用.


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