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培养箱除菌剂

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 广义上来说,凡是细胞培养体系中的外来成分或成分变化,都应视为污染,细胞污染不能完全被消除,但能减少其发生的频率和后果的严重性。细胞污染根据污染源主要可以分为物理性,化学性和生物性污染。


1、物理性污染

物理性污染通过影响细胞培养体系中的生化成分,从而影响细胞的代谢,如温度、放射线、振动、辐射(紫外线或荧光)会对细胞产生影响。常见的例子有:培养箱温度过高、周围放置能引起机械振动的设备、试剂放在有玻璃门的冰箱中长期受到光照等。物理性污染常常被人们所忽视或被笼统地归为化学性污染。

2、化学性污染

培养环境中许多化学物质都可以引起细胞的污染。化学物质并不总是抑制细胞的生长,某些化学物质如激素就可促进细胞的生长。未纯化的物质、试剂、水、血清、生长辅助因子及储存试剂的容器都可能成为化学性污染的来源。为了避免金属离子、有机分子、细胞内毒素等物质对水的污染,在配制液体,清洗容器时必须使用不含杂质的超纯水。细胞培养使用的所有物质都应是高纯度的,并经过权威机构的鉴定,实验者本人也应对上述成分进行纯度鉴定。同时,正确配置和储存培养液及试剂也是非常重要的,应该采取标准的操作步骤,避免液体体积计算错误,混用类似化合物等错误。

3、微生物污染

微生物污染的原因可分为2个阶段:实验准备阶段和实验操作过程。准备阶段的原因包括:实验耗材灭菌不彻底;细胞房清洁度不够,增加微生物污染风险;超净台洁净度不够,消毒不够彻底,紫外线没有预先照射足够时间,表面没有用酒精擦拭;没有带无菌乳胶手套;试剂本身已经污染,没有检测出来。实验操作中的污染,往往是不够严谨,粗心大意造成,如:手从无菌试剂的上方经过;移液器操作不当,液体接触到移液器前端;移液管吸液过猛;吸头忘记更换,导致交叉污染等。

不同的微生物污染物对细胞的影响也有差别,微生物中支原体和病毒对细胞形态和技能的影响是长期的、缓慢的和潜在的。而霉菌和细菌增殖迅速,能在很短的时间内抑制细胞生长或产生毒素杀死细胞。

1)霉菌污染:种类很多,导致细胞污染的大多是曲霉菌、白色念珠菌、酵母菌、黑霉菌、孢子菌等。霉菌污染后多数在培养液中形成淡黄色或是白色的漂浮物,一般肉眼可见,较易被发现,短期内培养液多不变混浊。倒置显微镜下可以看见细胞之间有纵横交错穿行的丝状,树枝状或管状菌丝,并漂浮在培养液中。很多菌丝在高倍镜下可以看见链状排列的菌株。念珠菌及酵母菌菌株呈卵圆形,散在细胞上及细胞周边生长。处理:确认是霉菌污染,如果细胞种类不是特别的珍贵,直接放弃,并将实验环节彻底消毒。万不得已,可以尝试抗霉菌素如两性霉素B来清楚污染,实际操作中效果很难保证。

2)细菌污染:细菌污染较常见的有大肠杆菌,白色葡萄球菌,假单孢菌等。加用抗菌素的培养液可预防和排除个别一般少量细菌的污染。一旦发生细菌污染很容易发现,多数情况下培养液短时间内变黄,表明有大量酸性物质产生,出现明显浑浊现象;有时静置的培养液起初不混,但稍加震荡,就有许多混浊物漂起。倒置显微镜下观察,可见培养液中有大量圆球状颗粒物漂浮,有时在细胞表面及周围有大量细菌存在,细胞停止生长并有中毒表现。必要时可取少量培养液涂片染色检查以明确细菌种类;有的培养液改变不明显而有疑似污染,亦可向肉汤培养基内滴入少量培养液,37度培养以检测。处理:一般用抗生素的常用量的5-10倍作冲击疗法,用药24-48小时后再换常规培养液,有时在早期污染时此法有效。

3)支原体污染:支原体是一种大小介于细菌和病毒之间(最小直径0.2um)并独立生活的微生物,约有1%可通过滤菌器。支原体无细胞壁形态呈高度多形性,可为圆形、丝状或梨形,在光境下不易看清内部结构。多数支原体适合于偏碱条件下生存(PH7.6—8.0),对酸耐受性差,对热比较敏感,对一般抗生素不敏感。支原体污染细胞后,培养液一般不发生混浊,多数情况下细胞病理变化轻微或不显著,细微变化也可由于传代、换液而缓解,因此易被忽视。但个别严重情况,可致细胞增殖缓慢,甚至从培养器皿脱落。如何确定是否有支原体污染,一般可用培养法或荧光染色法检测,市场上有多种支原体检测的试剂盒,本人试用过几种,先达基因(gendx.cn)的ERA法支原体快速检测试剂盒还不错,两步操作,20min出结果,灵敏度较高、速度比较快、操作简单灵敏,可检出的支原体覆盖范围非常比较广,超过130(亚)种。
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