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炭疽芽孢杆菌PCR试剂盒

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产品及特点

炭疽芽孢杆菌(Bacillus anthracis) 属于芽孢杆菌属,是引起某些家畜、野兽和人类炭疽病(人畜共患)的病原菌。发病率最高的是牛羊,猪也可发生,人常因屠宰、食用或与病死畜接触而感染。炭疽杆菌对社会公共卫生和经济发展的危害,迄今仍占相当大的比重。由该菌引起的炭疽病几乎遍及世界各地,四季均可发生,因此快速检测炭疽芽孢杆菌具有重要意义。本试剂盒根据荧光定量PCR原理开发,它具有下列特点:

1. 即开即用,用户只需要提供细菌DNA模板。

2. 引物经过精心优化,专一性强,只扩增炭疽芽孢杆菌

3. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。

4. PCR mix中含上样染料,PCR后可以直接上样电泳。

5. 试剂盒足够做40μL体系的PCR 50次。

6. 本产品只能用于科研

 

规格及成分

成  份

编号

十孔包装

PCR MagicMix 3.0

90805

1 mL(亮黄盖

超纯水

100935

1 mL(蓝色)

炭疽芽孢杆菌PCR引物混合液

13-25410yw

100 μL(白

炭疽芽孢杆菌PCR阳性对照

13-25410pc

100 μL(黄

天净沙DNA释放剂试用装

130982

50次(试用装)

使用手册

13-25410sc

1份

 

 

运输及保存

低温运输,-20℃保存,保存期限为一年阳性对照需要单独放置,不要污染其他试剂。

 

自备试剂

样品DNA

 

使用方法

一、样品DNA的制备

1. 如果有N个样品,必须设置N+2个提取,多出的一个是PC(样品制备阳性对照)一个是NC样品制备阴性对照)。可以用10μL阳性对照的10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟次制备要求的体积一样以此作为PC另外用水作为NC。

2. 用自选方法纯化样品的DNA,本试剂盒跟市场上大多数细菌DNA提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的细菌DNAout细菌DNAout。本试剂盒免费赠送50次免DNA提取的天净沙DNA释放剂,本产品的裂解液可以直接作为PCR模板,省略了DNA提取步骤。

二、设置PCR反应(40 μL体系)

3. 对N+2个样品,在PCR时需要增加一个PCR阳性对照和一个PCR阴性对照,故需要设置N+4个反应。在N+4个PCR管中分别加入下列成分:

成分

N+2

样品

PCR阴性对照

PCR阳性对照

PCR MagicMix 3.0

各20 μL

20 μL

20 μL

炭疽芽孢杆菌 PCR引物混合液

各2 μL

2 μL

2 μL

N+2个样品DNA模板

各18 μL

-

-

样品制备阴性对照

-

18 μL

-

样品制备阳性对照

-

-

18 μL

4. 下表设置PCR反应:

过程

温度

时间

预变性

94

5 min

PCR反应

(35个循环)

94

20 sec

50

20 sec

72℃

30 sec

最后延伸

72

10 min

三、电泳检测

5. 取10-20 μL PCR产物。电泳检测PCR产物。本产品提供的PCR Mix在扩增结束后可以直接上样,不需要另外再加loading buffer。预期的PCR产物长度为208bp。阳性对照必须有此条带出现,阴性对照必须无任何扩增,否则实验无效。对没有扩增产物的样品,可以稀释10倍后重复PCR扩增以排除PCR抑制剂的感染。

 

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