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柱式腐殖酸清除剂

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产品及特点

用绝大多数文献报道的方法从土壤或湖海沉积物中提取的 DNA 都含有棕黑色或黑色的腐殖酸的污染,用天泽基因的土壤 DNAOUT 从泥碳(腐殖酸含量超过 50%) 等腐殖酸丰富的土壤样品中提取的 DNA 也有腐殖酸污染,它们往往对 PCR 等后续反应有极大的抑制作用。本产品从天泽基因柱式 DNABACK 改进而得,专门用于从土壤 DNA 样品中清除腐殖酸污染。

1.去污染效果好,能使腐殖酸的浓度降低 10 倍以上。

2.DNA 回收率高,一般都在 80%以上。

3.操作过程简单快速,只需要 10 分钟。

4.扩容性好,可小规模操作,也可以大规模操作。

5.处理后的样品原液或稍微稀释后即可用于 PCR。

运输及保存常温运输及保存,有效期一年。

自备试剂

使用方法

1.活化离心吸附柱:将 0.7 mL 吸附柱活化液加入到离心吸附柱中,套上套管后静置 2 分钟,室温 13000 g 离心 1 分钟,倒掉收集管中的液体。套上套管后再短暂离心半分钟后倒弃穿透液。套上套管后待用。已经活化的离心吸附柱最好当天使用。

2.将 600 mL 专用上柱液与不超过 100 uL 的含腐殖酸的 DNA 溶液轻柔混匀。如果DNA 溶液体积超过 100 uL, 专用上柱液的体积需按 1:6 (DNA 溶液:专用上柱液) 的比例相应增加。本试剂盒多提供了 7mL 上柱液供此情况下使用。如果需要更多上柱液,则需要另购。

3.将离心管中的溶液转移到离心吸附柱中,套上收集管,放于离心管架上,静置3-5 分钟。

4.室温 13000 g 离心 1 分钟,倒掉收集管中的液体。若一次加不完,可分两次加入并离心。

5.加入 0.5 mL 通用洗柱液于吸附柱中,13000 g 离心 1 分钟,弃收集管中废液。

6.重复上步洗涤操作 1 次。

7.13000 g 离心半分钟以去除离心柱中的残留液体(含乙醇)。

8.将离心柱置于一新的干净的离心管(自备)中,加入 50 uL DNA 洗脱液 3.0, 并静置 3-5 分钟。

9.12000-15000 g 离心 1 分钟,离心管底部所得溶液即为纯化的 DNA 溶液,可立即用于后续实验或者放冰箱长期保存。

图注:从泥碳(腐殖酸含量大于60%)中提取的DNA用本产品处理前(B)和处理后(A)的 颜色对比。

处理前OD340为4.0(4为所用分光光度计的上限,实际读数可能远高于4),处理后降低到0.3。处理前的原液、10倍和100倍稀释液均无PCR扩增,而处理后均可以扩增。

 Q:本产品与柱式DNABACK 有何区别?

A:本产品由柱式DNABACK 改进而来,主要区别一是使用了不同的上柱液,减少了硅胶膜对DNA 的非特异吸附,更适用于微量DNA 样品;二是上柱液中含有腐殖酸去除试剂,适合于土壤DNA 样品。

Q:在用土壤DNA 进行细菌专一性PCR 时,为何没加DNA 模版的阴性对照有扩增产物出现?

A:这是由于使用的 Taq DNA 聚合酶一般从 E.coli 表达菌株中提取,提取过程中污染了 E.coli 的基因组 DNA,而使用的广谱细菌专一性引物可以识别所有细菌DNA 基因组DNA 模版,所以会产生扩增。建议使用高质量的Taq DNA 聚合酶。

 

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