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柱式Sephadex 探针纯化试剂盒

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 柱式Sephadex 探针纯化试剂盒是基于分子排阻层析原理的、专门用于纯化同位素和非同位素标记的核酸探针的试剂盒。在分子排阻层析过程中,大分子(标记的核酸探针或Oligo 探针将绕过层析介质,快速穿透出层析柱,小分子(未参入的核苷酸将进入层析介质中,缓慢穿透出层析柱。根据这一时间差而将两者分开。此过程的示意图如下:

 

本产品具有下列特点:

1. 即开即用,提供纯化所需要的所有溶液和介质,不需要单独准备每种试剂, 免去用户自己摸索条件。

2. 适用于 PCR 标记、随机引物标记、切口平移和填入法标记。

3. 能去掉绝大部分的未标记物、盐离子等小分子。

4. 足够 10 次纯化使用,每次可以纯化 50 uL 的标记反应液。

5. 可用于 DIG、生物素、Cy3Cy5 等非同位素标记的 DNA  RNA 探针

由于标记分子带非极性基团,容易进入有机相,因此这些探针不能用传  统的酚氯仿抽提-乙醇沉淀法纯化

 

成份

编号

10 次小纸盒包装

Sephadex G50 介质

121115A

15 mL

0.7 mL 离心柱及管套

121115B

10 套

TE 溶液

80934

10 mL

使用手册

1 份

 

注意:由于非同位素标记的探针浓度一般都比较低,非常容易吸附到枪头或离心管的表面,造成探针的损失,因此最好使用硅化的离心管和枪头。

1. 摇晃 Sephadex G50 介质至均匀,迅速转移 0.5 mL 到离心柱中,套上套管(又叫收集管

2. 2000rpm 室温离心 1 分钟,Sephadex G50 介质将压紧在柱子里面。

3. 倒掉套管中的穿透液,再加 0.5mL 的摇晃后得到的 Sephadex G50 介质,2000rpm 室温离心 1 分钟。

4. 经上述步骤会得到体积约为 0.5mL 压紧后的 Sephadex G50 介质。如不足,再加入少量的 G50 介质离心,直到体积达到 0.5 mL 左右。倒掉套管中的穿透液。

5. 在柱子中 Sephadex G50 界面的上面加入 50 uL TE 缓冲液,套上套管, 2000rpm 室温离心 1 分钟,测量收集管中穿透液的体积。

6. 重复上步 3-5 次,直到收集管中穿透液的体积跟加入的体积一样50 uL

7.  50 uL 的标记探针必须使用 50 uL 样品。如果没有 50 uL,需要用TE 缓冲液或水补足到 50 uL)加到柱子中 Sephadex G50 界面的上面, 套上一个自备的(最好是硅化的)离心管。

8. 2000rpm 室温离心 1 分钟,离心管中的穿透液将含标记探针,未参入的标记物将滞留在介质中。

电泳或点杂交检测探针回收效率后直接使用或放-20℃长期保存

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