Thermostable RNase H

 Thermostable RNase H，即耐热RNase H，是一种在较高温度(65℃以上)时仍然保持活性的核糖核酸内切酶(endoribonuclease)。Thermostable RNase H可以选择性识别并酶切RNA:DNA杂合双链中的RNA的磷酸二酯键，同时杂合双链中的DNA会保持完整。Thermostable RNase H不会降解单链或双链的RNA或DNA。

Thermostable RNase H在65℃以上温度时仍具有很高的酶活性，其在70℃时的半衰期可达几个小时，在高达95℃时的半衰期仍可达30分钟左右。 该酶的耐高温特性使得异源双链RNA:DNA杂交分子具有更高的特异性，并在较高温度下更特异性地降解杂合双链中的RNA。Thermostable RNase H具有与常见的E. coli RNase H具有类似的酶学性质，但E. coli RNase H在高于55℃时即失活。

Thermostable RNase H与E. coli RNase H的热稳定性比较请参考图1。

图1. R7090 Thermostable RNase H与E. coli RNase H的热稳定性比较。在20µl反应体系中加入图中指定量的Thermostable RNase H或E. coli RNase H，在65℃孵育20min后，Thermostable RNase H和E. coli RNase H分别按照其标准的反应条件(Thermostable RNase H 50℃孵育20min；E. coli RNase H 37℃孵育20min)进行RNA:DNA杂交链的酶切反应，反应完毕后立即冰浴3-5分钟并加入1μl 0.5M EDTA终止反应。取出5μl反应液，加入1μl 6×DNA Loading Buffer，然后进行15%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(冰浴条件下180V电泳45min；之后用NA-Red (D0128 NA-Red (EB升级换代产品, 2000X))室温染色15min，即可拍照观察结果)。如图所示，E. coli RNase H在65℃时失去活性，而Thermostable RNase H在65℃时仍保持活性。热稳定性比较反应体系(20μl)：Thermostable RNase H：50mM Tris-HCl (pH 8.3), 75mM KCl, 3mM MgCl2, 10mM DTT, 400ng RNA:DNA杂合双链以及不同量的Thermostable RNase H (包括未经热处理和在65℃孵育20min热处理)，50℃孵育20min；E. coli RNase H：20mM Tris-HCl (pH 7.8), 40mM KCl, 8mM MgCl2, 1mM DTT, 400ng RNA:DNA杂合双链以及不同量的E. coli RNase H (包括未经热处理和在65℃孵育20min热处理)，37℃孵育20min。

Thermostable RNase H催化降解RNA:DNA杂合双链中的RNA链的效果请参考图2：

图2. 碧R7090 Thermostable RNase H和竞争公司的同类产品的效果比较图。使用本产品或N公司(Competitor)的Thermostable RNase H，在20µl反应体系中加入图中指定量的本产品或国外N公司的Thermostable RNase H，50℃孵育20min进行反应，反应完毕后立即冰浴3-5分钟并加入1μl 0.5M EDTA以终止反应。取出5μl反应液，加入1μl 6×DNA Loading Buffer，然后进行15%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(冰浴条件下180V电泳45min；之后用NA-Red (D0128 NA-Red (EB升级换代产品, 2000X))室温染色15min，即可拍照观察结果)。如图所示，本产品与N公司的产品相比，具有类似的催化效果。RNA:DNA杂合双链反应体系(20μl)：50mM Tris-HCl (pH 8.3), 75mM KCl, 3mM MgCl2, 10mM DTT, 400ng RNA:DNA杂合双链以及不同量的Thermostable RNase H，50℃孵育20min。

用途：高严谨度的RNA结构图谱的描绘和位点特异性RNA切割；与oligo (dT)杂交的mRNA的poly (A)尾的酶切去除；cDNA合成后去除mRNA；用于等温扩增实验；用于和特定DNA序列杂交后酶切去除特定的RNA序列，例如rRNA的去除等。

来源：大肠杆菌表达的重组蛋白。

活性定义：One unit is defined as the amount of enzyme required to produce 1 nmol of ribonucleotides from 40 pmol of a fluorescently labeled 25 base pair RNA:DNA hybrid in a total reaction volume of 50 µl in 20 minutes at 50℃。

纯度：纯度大于95%，不含DNA内切酶和外切酶，不含其它核糖核酸酶。

酶储存溶液：50mM Tris-HCl (pH7.5), 100mM NaCl, 1mM DTT, 0.1mM EDTA, 0.1% Triton® X-100, 50% (v/v) Glycerol。

10XReaction Buffer：500mM Tris-HCl (pH 8.3 at 25℃), 750mM KCl, 30mM MgCl2, 100mM DTT。

失活或抑制：加入适量蛋白酶K消化或加入5%体积的0.5M EDTA pH8.0。

包装清单：

保存条件：

-20℃保存，至少一年有效。

注意事项：

本产品的最佳反应温度高于65℃，在95℃时仍具有活性，其在65℃时的活性是在37℃时的3-4倍。

本产品在使用说明中建议的反应温度是50℃，在实际实验操作中可以酌情通过提高反应温度提高其酶活性。

本产品的反应缓冲液中包含MgCl2，当Thermostable RNase H在高温时应用于RNA/DNA杂交链或者RNA样品时，建议适当限制反应时间和温度，以减少金属介导的单链RNA降解。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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