Uracil-DNA Glycosylase （Heat-labile, Bacterium）

  Uracil-DNA Glycosylase (Heat-labile, Bacterium)，也称Heat-labile Bacterial UDG，即热敏型细菌UDG，来源于嗜冷海洋细菌(psychrophilic marine bacterium) BMTU3346，可催化含尿嘧啶的DNA链中的尿嘧啶(dU)碱基和脱氧核糖之间的N-糖苷键发生水解，从而释放游离尿嘧啶。Uracil-DNA Glycosylase (UDG)可以水解含有dU的单链或双链DNA，但不能水解RNA或含有dU的长度不超过6个碱基DNA寡聚体。

UDG主要应用于消除PCR扩增过程中带来的产物污染问题。其防止污染的原理为：在PCR反应中加入适量的dUTP，以dUTP替代dTTP掺入DNA中，形成含dU碱基的PCR扩增产物；后续进行PCR反应时，使用UDG酶选择性切割可能被污染而带入的之前PCR扩增产生的含有dU的单链或双链DNA，从而避免之前的PCR扩增产物可能的污染对于本次PCR扩增带来的负面影响。

本产品为热敏型，在50℃孵育10分钟可以迅速不可逆灭活。在PCR或RT-PCR反应前，PCR或RT-PCR体系中加入Heat-labile Bacterium UDG室温处理10min，即可充分消除可能的之前的含有dUTP的PCR扩增产物的污染。本产品不仅适用于PCR，也适用于qPCR、RT-PCR和qRT-PCR等体系。

活性定义：One unit is defined as the amount of enzyme that catalyzes the release of 60 pmol of uracil per minute from double-stranded, uracilcontaining DNA. Activity is measured by release of [3H]-uracil in a 50 µl Standard Taq Reaction Buffer containing 0.2 µg DNA (104–105 cpm/µg) in 30 minutes at 37℃.

Heat-labile Bacterial UDG酶活性鉴定结果可参考图1。

图1.Heat-labile Bacterial UDG催化酶解5µl含dU碱基的PCR扩增产物效果图。使用本产品或国外N公司的酶，在20µl体系，分别以5µl含dU碱基的PCR扩增1500bp PCR产物为底物和不同量的(0U, 0.0313U, 0.0625U, 0.125U, 0.25U, 0.5U) Heat-labile Bacterial UDG，在1X Heat-labile Bacterial UDG Buffer，37℃孵育30min，然后进行1%的琼脂糖凝胶电泳检测。如图所示，本产品与N公司相比，具有相当的酶活。M, DNA marker (D0110 DNA Ladder (0.2-12 kb, 12 bands))。

Heat-labile Bacterial UDG经灭活处理后酶活鉴定结果可参考图2。

图2.Heat-labile Bacterial UDG以及E. coli UDG (D7360)经50℃10min处理后，催化酶解5µl含dU碱基的PCR扩增产物效果图。将不同量的E. coli UDG (0U, 0.005U, 0.01U, 0.025U)和不同量的Heat-labile Bacterial UDG (0U, 0.0625U, 0.125U, 0.25U)经50℃处理10min之后，在20µl体系，分别以5µl含dU碱基的PCR扩增1500bp PCR产物为底物，在1X Heat-labile Bacterial UDG Buffer，37℃孵育30min，然后进行1%的琼脂糖凝胶电泳检测。如图所示，E. coli UDG 50℃处理10min之后酶活仅轻微下降，而Heat-labile Bacterial UDG均完全灭活。M, DNA marker (D0110 DNA Ladder (0.2-12 kb, 12 bands))。

来源：大肠杆菌重组、表达和纯化而获得。

纯度：不含UDG酶活力之外的内切或外切脱氧核糖核酸酶、RNase和磷酸酶活性。

用途：去除单链或双链DNA尿嘧啶碱基；去除含dU的PCR产物气溶胶污染；在二代测序(NGS)应用中，主要用于mRNA定向测序文库的构建；用于提高定向诱变方法的效率和用来获得高度标记的寡核苷酸探针；用于PCR、qPCR、RT-PCR、RT-qPCR体系。

酶储存溶液：20mM Tris-HCl (pH 7.5), 50mM NaCl, 0.1mM EDTA, 1mM DTT, 50% (v/v) glycerol。

10X Heat-labile Bacterial UDG Buffer：100mM Tris-HCl, 500mM KCl, 15mM MgCl2, pH 8.3 at 25℃。

失活或抑制：50℃加热10min可以使Heat-labile Bacterial UDG完全失活。

包装清单：

保存条件：

-20℃保存，至少一年有效。

注意事项：

Heat-labile Bacterial UDG酶在大多数PCR或RT-PCR体系中均具有活性，但对于自行使用的PCR或RT-PCR体系，首次使用时建议先测试一下是否和所使用的体系兼容。通常取含dUTP的PCR扩增产物，参考图1加入适量UDG，观察能否有效降解含dUTP的PCR扩增产物。本产品会被高离子强度(>100mM)所抑制。

dNTP/dUTP推荐选购D7376 dNTP/dUTP Mixture (2.5mM each/5mM)。

Heat-labile Bacterial UDG酶对双链DNA的活性低于对单链DNA的活性，对小的U-DNA寡核苷酸和dUMP有活性，但对RNA或正常的不含dUTP的DNA没有活性。

Heat-labile Bacterial UDG酶活对于金属离子没有依赖性，在Mg2+或EDTA的存在情况下均具有活性。

由Heat-labile Bacterial UDG酶消化产生的DNA链的无碱基位点可通过加热，碱处理或核酸内切核酸酶处理而除去。通常PCR反应过程中的加热步骤可以确保UDG酶消化的位点被完全剪切开。

Heat-labile Bacterial UDG酶可以在PCR反应前清除不慎污染的含dUTP的PCR产物，从而避免由于污染导致的PCR假阳性结果。

如果需要将Heat-labile Bacterial UDG酶应用于One-Step RT-PCR或者One-Step qRT-PCR体系，需要选择耐热反转录酶，并需要将逆转录温度设置为50-55℃。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：
1.按照常规反应体系设置PCR或RT-PCR反应体系，同时加入Heat-labile Bacterial UDG至最终浓度为0.02U/μl，混匀。通常仅加入PCR或RT-PCR的buffer即可，无需加入UDG的buffer。
2.25℃孵育5-10min (去除可能的含dUTP的PCR扩增产物的污染)，随后进入PCR或RT-PCR程序。​​