产品简介:
MTT 比色法是一种检测细胞存活和生长的方法，MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)被广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的检测,MTT检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色Formazan并沉积在细胞中，而死细胞无此功能，在特定溶剂存在的情况下可以被完全溶解，然后通过酶标仪可以测定570nm波长附近的吸光度，细胞增殖越多越快，则吸光度越高;细胞毒性越大，则吸光度越低。雅吉生物 MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒采用了自主研发FormazanSolvent，使检测本底低，灵敏度高，线性范围宽。
该试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。
自备材料:
1、细胞培养液、胰蛋白酶消化液
2、低速离心机、96孔培养板、细胞计数板或计数器、摇床、显微镜、酶标仪
操作步骤(仅供参考):
1、细胞用含血清的培养液培养至对数生长期,常规胰蛋白酶消化液消化细胞(悬浮细胞无需消化)。
2、低速离心，收集细胞沉淀。
3、用培养液重悬细胞沉淀，制备成单细胞悬液，并计数。
4、细胞接种于96孔培养板，一般接种密度为3000～10000个细胞/孔，通常细胞增殖实验每孔加3000个细胞，细胞毒性实验每孔加入6000个细胞，具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定。
5、37℃ 5%CO2继续培养或按照实验具体需要进行培养，一般培养6~24h。
6、按照实验具体要求，给予0～20ul干预药物处理，37°C 5%CO2继续培养至合适时间。
7、弃培养液，每孔加入10ul MTT Solution和100ul新鲜培养液，在细胞培养箱内继续孵育4h。
8、弃培养液，每孔加入110ul Formazan Solvent，置摇床上低速振荡10 min，使结晶物充分溶解;如果紫色结晶较小或较少，溶解的时间会短一些;如果紫色结晶较大或较多，溶解的时间会长一些。
9、在酶标仪570nm测定各孔吸光度。
注意事项:
1、MTT Solution(5mg/ml)为黄色，需避光保存，长时间光照会导致失效。尽量减少反复冻融的次数，以免失效，当颜色变为灰绿色时，请勿使用。
2、由于使用96孔板进行检测，如果细胞培养时间较长，应注意蒸发问题。
3、MTT Solution在低温情况下会凝固，置于室温或20～25°C℃水浴至全部融解后使用。
4、Formazan Solvent 可以-20°C储存，当产生沉淀或凝固时可以37C水浴孵育以促进溶解，并且必须在全部溶解并混匀后使用。
5、观察Formazan是否完全溶解，亦可以借助光学显微镜观察。6、培养细胞时尽量细菌避免污染。
7、应注意设立OD调零孔和对照。
8、试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。
9、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期:12个月有效。
低温运输,按要求保存。
