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分枝杆菌DNAOUT

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 产品及特点

分枝杆菌属(Mycobacterium)是极为古老的细菌,与人类的疾病相关的就   有25 种以上,包括引起结核病的结核分枝杆菌(Mycobacteria tuberculosis)近年来由于多重耐药性分枝杆菌的出现,分枝杆菌再次成为人们关心的细菌。PCR 快速诊断是目前检测分枝杆菌的主流方法,但由于此类细菌具有十分独特的坚硬的细胞壁,快速提取其基因组DNA 一直是十分棘手的技术问题。本产品就是为解决这一问题而开发,具有下列特点:

1. 每克分枝杆菌湿重可以提取到3-4mg 基因组DNA。

2. 操作简单,整个过程约60 分钟左右,容易放量操作。

3. 适用于培养的分枝杆菌,也适用于含分枝杆菌的痰液等样品。

4. 价廉物美,与国外同类产品相比质量相当,但价格便宜。

使用及效果

根据样品不同进行不同预处理(详细步骤见操作手册)。将150 μL 65℃预热过的溶液A加到预处理得到的装有分枝杆菌沉淀的离心管中,充分震荡使细菌均匀悬浮。再向离心管中加入300 μL 溶液B(呈乳浊状)和300 μL 自备氯仿,充分震荡混匀。将混合液-20℃放置20-60分钟,待凝固后进入下一步。将样品管放室温融化后12000-15000   g室温离心5分钟,小心转移上清到一新的离心管中。用2倍体积的无水乙醇沉淀DNA,12000-15000 g 室温离心10分钟。用1 mL 自备70% 乙醇洗涤DNA去除杂质,最后用50-100 μL TE缓冲液充分溶解DNA沉淀。详细步骤请参照使用手册。


结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)

分枝杆菌属(Mycobacterium)是一类细长略带弯曲的杆菌,有分枝生长的趋势,因而 得名。本菌属种类颇多,可分为三组:结核杆菌、非结核分枝杆菌、麻风杆菌。其中结核杆菌

Mycobacterium tuberculosis)是引起人及动物结核病(tuberculosis)的病原菌,俗名结核杆菌tubercle bacillus)。它是细长略带弯曲的杆菌,有时见到分枝状或索状。常用Lowenstein-Jensen培养基培养,生长缓慢,最适宜的生长温度为35-37℃,pH6.5-6.8。繁   殖一代需14-18小时,2-5周才出现肉眼可见的菌落,典型菌落为粗糙型,奶酪状。结核杆菌  细胞壁中含有大量脂质(结核杆菌细胞壁所含的脂类约占细胞壁干重的60%),可防止菌体水分的丢失,故对干燥的抵抗力特别强。对化学消毒剂的抵抗力也较一般细菌强。但怕热(对湿热敏感)、怕酒精、怕阳光(对紫外线敏感),在液体中加热62-63℃15分钟,或在75%酒精中作 用数分钟即可被杀死,直接日光照射2-7小时。结核杆菌易发生菌落、毒力和耐药性等方面的变异。如例如用以预防结核病之卡介苗(Bacille Calmette-Guerin,BCG)是将.牛型结核杆菌(Mycobacterium bovis)继代培养在胆汁培养基13 年,使失去毒力成为无毒株。

结核杆菌通常难以着色,故不被革氏法染色。 致病物质:结核杆菌不产生任何内、外毒素以及侵袭酶。其毒力可能与下述四种物质有关:索状因子(cord  factor)、C-分枝菌酸苷酯(C-mycosides)、硫酸脑苷酯(sulfatides)分枝杆菌生长素(mycobactin)

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