产品简介：
外源基因导入真核细胞的方法有很多种，如磷酸钙转染法、 DEAE-葡聚糖转染法、脂质体法、电穿孔法、显微注射法等。磷酸钙法细胞转染试剂盒(Calcium Phosphate Cell Transfection Kit)是在传统的磷酸钙细胞转染方法的基础上进行了改良，提高了转染效 率，并降低了毒性，可用于磷酸钙法转染细胞，不仅可以瞬时表达，也可以筛选稳定株。 HEK293 是最适合磷酸钙法转染的细胞之一，优化条件后转染效率可以高达 85%以上，一般的转染效率可达 40～50%左右。其他常见细胞(例如 Hela、CHO 细胞等)也适合磷酸钙法转染，但效率比 293 细胞要略低一些。本转染试剂盒主要适合于大多数贴壁细胞的转染，也可于一些悬浮细胞的转染，一般要求 DNA 浓度在 10～50μg 为宜，Hela、BALB 等细胞沉淀放置 16h，CHO、DUKX、BⅡ等细胞可以通过甘油、DMSO 进行热休克处理以提高转染效率。
产品组成：
试剂(A): Calcium chloride solution
试剂(B): BBS solution
自备材料：
1、胰蛋白酶消化液
2、完全培养基
3、PBS
4、无菌水
操作步骤(仅供参考)：
(一)贴壁细胞转染：
1、在转染前 24h 用胰蛋白酶消化培养细胞，取适量对数期细胞转移至新的培养器皿中，待细胞密度达 70～80%即可进行转染。后续操作步骤均按 6 孔板计算，如果转染器皿不同，请按比例自行调节用量。
2、在加入 DNA 之前 2～4h，加入 2ml 不含抗生素的完全培养液，置于 37℃ 5% CO2培养箱培养。3、取 2～6μg DNA(体积不宜超过 20μl)加入 100μl Calcium chloride solution，混匀，
即为 DNA-CaCl2溶液。
4、取 BBS solution 100μl，用移液器一边吹打 BBS solution，一边逐滴加入 DNA-CaCl2 溶液(操作缓慢，一般在 1～2min)。
5、室温静置 20～30min，即为 DNA-CaCl2-BBS 溶液，此时可能出现极其微小颗粒沉淀。
6、取 DNA-CaCl2-BBS 溶液底部物质均匀加入到 6 孔板细胞中，轻轻晃动混匀。
7、置于 37℃ 5% CO2培养箱培养 4～16h。如果培养细胞为 CHO、DUKX 等，可以 DMSO 或甘油进行休克处理，转染效率会大大增加，即培养 4～6h 后，用 2ml 含 10%甘油或 20%DMSO 的完全培养液替换当前培养液，室温下静置 3min，加 5ml PBS 摇动混匀。
8、去除培养液，用 PBS 清洗细胞 2 次，加入 2ml 完全培养液继续培养，一般 24h 后可见 转染细胞的表达。
(二)悬浮细胞转染：
1、低速离心收集悬浮细胞，用 PBS 洗涤 1 次。
2、取 2～6μg DNA(体积不宜超过 20μl)加入 100μl Calcium chloride solution，混匀， 即为 DNA-CaCl2溶液。
3、取 BBS solution 100μl，用移液器一边吹打 BBS solution，一边逐滴加入 DNA-CaCl2 溶液(操作缓慢，一般在 1～2min)。
4、室温静置 20～30min，即为 DNA-CaCl2-BBS 溶液，此时可能出现极其微小颗粒沉淀。
5、每 10 个细胞沉淀用 100μl DNA-CaCl2-BBS 溶液重新悬浮，室温放置 20～30min。
6、6 孔板6每孔加入 2ml 不含抗生素的完全培养基，取 DNA-CaCl2-BBS 溶液底部物质均匀 加入到 6 孔板中，轻轻晃动混匀。
7、置于 37℃ 5% CO2培养箱培养 4～16h，去除培养液，用 PBS 清洗细胞 2 次，加入 2ml 完全培养液继续培养，一般 24h 后可见转染细胞的表达。
注意事项：
1、 注意无菌操作，尽量避免污染，同时 DNA 不应含有蛋白和酚。
2、 休克处理某些细胞系会使转染效率大大提高，但应注意甘油暴露过久易导致细胞死亡。
3、 转染 12～24h 后，可以加入终浓度为 10mmol/L 的丁酸钠溶液，可以提高病毒滴度。
4、 BBS solution 的 pH 值直接关系到转染效率，尽量避免长时间暴露在空气中，以免被 空气中的二氧化碳酸化。
有效期： 6 个月有效。
