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谷胱甘肽还原酶(GR)试剂盒

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    意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

GR是广泛存在于真核和原核生物中的一种黄素蛋白氧化还原酶,是谷胱甘肽氧化还原循环的关键酶之一(通常昆虫中GRTrxR取代)。GR催化NADPH还原GSSG生成GSH,有助于维持体内GSH/GSSG比值。GR在氧化胁迫反应中对活性氧清除起关键作用,此外GR还参与抗坏血酸-谷胱甘肽循环途径。


测定原理:

GR能催化NADPH还原GSSG再生GSH,同时NADPH脱氢生成NADP+NADPH340 nm有特征吸收峰,相反NADP+在该波长无吸收峰;通过测定340 nm吸光度下降速率来测定NADPH脱氢速率,从而计算GR活性。


自备仪器和用品

紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、移液器、1mL石英比色皿和蒸馏水


试剂组成和配置:

试剂一:液体100mL×14℃保存。

试剂:粉剂×2瓶,-20℃保存。临用前加入3 mL蒸馏水,混匀。

试剂:粉剂×2-20℃保存。临用前加入1.5 mL蒸馏水,混匀。


粗酶液提取:

1. 组织:按照组织质量(g:提取液体(mL)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆。8000g4离心15min,取上清,置冰上待测。

 

2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~10001的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后8000g4,离心15min,取上清置于冰上待测。

 

3. 血清等液体:直接测定。


操作步骤

1. 分光光度计预热30 min,调节波长到340 nm,蒸馏水调零。

2. 试剂一置于25℃(普通物质)或者37℃(哺乳动物)中预热30min

3. 测定管:取1mL石英比色皿,依次加入50μL试剂三,100μL试剂二, 750μL试剂一100μL上清液,混匀,340nm迅速测定初始吸光度180 s吸光度,记为A1A2A测定管= A1A2(注意 加完上清液后迅速混匀测定)

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