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抗坏血酸(AsA)/维生素C含量试剂盒

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    意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

AsA又称维生素cAsA是辅酶、自由基清除剂、电子共体/受体和草酸盐与酒石酸盐生物合成的底物等。作为植物细胞中最重要的抗氧化剂,AsA在保护叶绿体免于氧化损伤起着举足轻重的作用,也是衡量农作物产品品质的重要指标之一。

测定原理:

在乙酸溶液中,抗坏血酸与固蓝盐B反应生成黄色的草酰肼–2–羟基丁酰内酯衍生物,在最大吸收波长420处测定吸光度。

自备仪器和用品:

研钵、冰、低温离心机、紫外分光光度计、1mL玻璃比色皿、可调式移液器和蒸馏水。

试剂组成和配制:

提取液:液体60mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:液体4mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:液体6mL×1瓶,4℃保存。

试剂三:粉剂×2瓶(棕色),4℃避光保存。临用前配制,每瓶加入7 mL蒸馏水充分溶解,用不完的试剂4℃下可保存3天。

1. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆。8000g4℃离心20min,取上清置冰上待测。

2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~10001的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);8000g4℃离心20min,取上清液置冰上混匀待测。

3.  血清等液体:直接测定。

AsA测定操作:

1. 分光光度计预热30 min,调节波长到420 nm,蒸馏水调零。

2. EP管中加入下列试剂

 

试剂名称

测定管

空白管

样本

200

 

提取液

 

200

试剂一

60

60

试剂二

100

100

试剂三

240

240

1400

1400

混匀,25℃静置20min,吸取1mL加入1mL玻璃比色皿中,420nm下测定各管吸光值。ΔA=A测定-A白。

注意空白管只需测定一次。

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