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BJ5183 感受态细胞

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  • 介绍: 基 因 型endA1 sbcBC recBC galK met thi-1 bioT hsdR (Strr)简 要 说 明BJ5183是一种具有较高重组活力的大肠杆菌菌株,是目前腺病毒系统最常用的感受态细胞。BJ5183菌株含有sbcBC recBC双重突变,赋予BJ5183细胞较强的重组能力,有利于转入的目的基因与腺病毒质粒{pAdeasy-1[encodes the Adenovirus-5 genome (E1/E3 deleted)]或pAdeasy-2[encodes the Adenovirus-5 genome (E1/E3/E4 deleted)]}的重组。endA1(缺失核酸内切酶)的突变有利于重组DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。Strr 赋予BJ5183菌株链霉素抗性。BJ5183感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率>5×108 cfu/μg DNA。
  • 操 作 说 明
  • 1.BJ5183感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的质粒(含有目标基因并线性化)和腺病毒质粒,并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰中静置25分钟。
  • 2.42℃水浴热激45秒,迅速放回冰中并静置2分钟,晃动会降低转化效率。
  • 3.向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB),混匀后37℃,200 rpm复苏60分钟。
  • 4.5000 rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
  • 5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
  • 注 意 事 项
  • 1.感受态细胞最好在冰中缓慢融化,插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。
  • 2.混入目的DNA时应轻柔操作。
  • 3.BJ5183菌株的质粒产量不高。腺病毒构建成功后,可选择在其他大肠杆菌菌株中扩繁,纯化质粒。
  • 4.BJ5183感受态细胞对温度敏感,应储存在-80℃超低温冰箱,避免温度波动,温度波动会降低感受态转化效率。
  • 储存条件: -80℃
  • 用途: 克隆感受态细胞
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