试验前请仔细阅读说明书，本产品仅供科研实验使用。
1. 所购产品均质量保证！
2. 试剂盒方面提供技术指导，Elisa试剂盒还可以提供代检测服务。
3.本公司出售的任何产品均保质保量，除以下情况，客户可联系我公司申请退换货售后服务
以下情况不予办理退换货：
1、已超过受理期限的产品，如过保质期。
2、由于客户自身操作原因导致实验失败。
3、由于客户没有仔细确认要订购的指标，导致自己的指标定错。
4、产品已使用（质量问题除外）。
产品简介：
多酚氧化酶(polyphenol oxidase，PPO)是自然界中分布极广的一种金属蛋白酶，普遍存在于植物、真菌、昆虫的质体中，甚至在土壤中腐烂的植物残渣上都可以检测到多酚氧化酶的活性，多酚氧化酶是一种蛋白体，在茶树生命活动和茶叶加工过程中参与一系列由酶促活动而引起的化学变化，故又被称为生物催化剂。该酶属于细胞木质素合成途径中间的关键酶，研究该酶可以探讨多种生物细胞发育过程中木质素沉积的代谢机理，为减少水果石细胞含量提高其品质提供依据。雅吉生物多酚氧化酶(PPO)检测试剂盒(邻苯二酚比色法)检测原理是以邻苯二酚作为底物，在酶促反应的最适条件下采用每隔一定时间测定产物生成量的方法，于酶标仪 420nm 处检测吸光度，以吸光度变化所需酶量进行计算。该试剂盒主要用于植物组织的裂解液或匀浆液、血清等样品中内源性的多酚氧化酶活性，尤其适用于检测水果中多酚氧化酶活性。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
自备材料：
1、蒸馏水
2、研钵或匀浆器
3、离心管或试管
4、低温离心机
5、96孔酶标板
6、酶标仪
操作步骤(仅供参考)：
1、准备样品：
①植物样品：取 2g 植物组织或水果中层果肉加入 4ml 预冷的 PPO Lysis buffer 研磨或匀浆，10000g，4℃离心 15-20min，留取上清液，-20℃冻存，用于多酚氧化酶的检测。
②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，
-20℃冻存，用于多酚氧化酶的检测。
③细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如有必要用PPO Lysis buffer 进行适当匀浆，10000g，4℃离心 15-20min，取上清液，-20℃冻存，用于多酚氧化酶的检测。
④高活性样品：如果样品中含有较高活性的多酚氧化酶，可以使用PPO Lysis buffer 稀释进行恰当的稀释。
2、PPO 加样：按照下表设置对照孔、测定孔，注意：对照孔、测定孔中为同一待测样品， 但对照孔中为提前加热煮沸 5min 的样品。溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的 PPO 活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置 2 平行孔，求平均值。
| 加入物(μ l) 待测样品 | 对照孔 20(提前煮沸 |
5min) | 测定孔 20 |
| PPO Lysis buffer | 140 |
| 140 |
| PPO Assay buffer | 40 |
| 40 |
3、PPO 检测：立即以酶标仪，以对照孔为对照（调零），测定 420nm 处对照孔的吸光度(A 测定 0)；1min 后立即测定 420nm 处测定孔的吸光度(A 测定 1 )。我们建议加入PPO Assay buffer后立即检测，加样时间越短越好，其反应基本在1-2min内，其后反应趋于平缓。
注意：该反应系统是利用速率变化，求得相应OD的变化，因此加入PPO Assay buffer立即计时很重要，每次检测指标不宜过多，否则有可能由于操作时间有差异进而导致结果偏差。
计算：
PPO 活性单位的定义：在该实验条件下，每 1min 吸光度变化 0.01 所需酶量为一个活性单位。
组织样本 PPO(U)={(A 测定 1-A 测定 0)×VT}/(W×VS×0.01×t)
式中：A 测定 1=反应 1min 后测定孔的吸光度
A 测定 0=加入 PPO Assay buffer 立即测定的测定孔吸光度W=组织样本的重量(g)
VT=提取酶液的总体积(ml) VS=测定时所用酶液体积(ml)
液体样本 PPO(U)=(A 测定 1-A 测定 0)/(0.01×t)
式中：A 测定 1=反应 1min 后测定孔的吸光度
A 测定 0=加入 PPO Assay buffer 立即测定的测定孔吸光度t=反应时间（min）=1
注意事项：
1、待测样品中不能含有酶抑制剂，同时需避免反复冻融。
2、PPO 酶液提取时，注意低温操作，防止酶活性。4℃保存 2-3 天，亦可-20℃保存。
3、以煮沸的酶液为对照时，酶要充分失活。
4、如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定；每次检测指标不宜过多，否则操作时间不一，有可能导致样本间的差异。
有效期：6 个月有效。
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