试验前请仔细阅读说明书，本产品仅供科研实验使用。
1. 所购产品均质量保证！
2. 试剂盒方面提供技术指导，Elisa试剂盒还可以提供代检测服务。
3.本公司出售的任何产品均保质保量，除以下情况，客户可联系我公司申请退换货售后服务
以下情况不予办理退换货：
1、已超过受理期限的产品，如过保质期。
2、由于客户自身操作原因导致实验失败。
3、由于客户没有仔细确认要订购的指标，导致自己的指标定错。
4、产品已使用（质量问题除外）。
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
几丁质酶（Chitinase）试剂盒微量法测定意义：
几丁质主要存在于虾、蟹、昆虫等甲壳类动物的外壳与软体动物的器官(例如乌贼的软骨)，
以及真菌类的细胞壁中。而几丁质酶(EC 3.2.1.14)可催化几丁质水解，具有抵御真菌侵染的
作用，成为抗真菌病害的研究热点。
测定原理：
几丁质酶水解几丁质产生N-乙酰氨基葡萄糖，进一步与对二甲氨基苯甲醛产生红色化合物，在585nm处有特征吸收峰，吸光值增加速率反映了几丁质酶的活性。
自备实验用品及仪器
天平、水浴锅、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、甲苯（土壤样品专用）和蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：液体 105mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体 10mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体 5mL×1 瓶，4℃保存。
试剂三：液体 5mL×1 瓶，4℃保存。
试剂四：液体 10mL×1 瓶，4℃避光保存。
粗酶液提取：
1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，
加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃离心20min，取上清，置冰上待测。
2. 真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000g，4℃，离心20min，取上清置于冰上待测。
3. 培养液：直接测定。
测定操作表：
1、分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至585nm，对照管调零。
2、操作表
|
| 对照管 | 测定管 |
| 粗酶液（µL） | 80 | 80 |
| 提取液（µL） | 120 | 40 |
| 试剂一（µL） |
| 80 |
| 混匀，37℃水浴 1h，5000rpm，4℃，离心 10min，取上清。 | ||
| 试剂二（µL） | 40 | 40 |
| 混匀，沸水浴 7min | ||
| 试剂三（µL） | 40 | 40 |
| |
|
|
| 试剂四（µL） | 80 | 80 |
| 混匀，37℃，15min，于微量石英比色皿/96 孔板，对照管调零，测定 A 585 。 | ||
计算公式：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y=2.3575x-0.0143，R2=0.9989
计算公式：
1、 按照样本重量计算
酶活性定义：37℃条件下，每克组织每小时分解几丁质产生1mg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活性单位。
几丁质酶活性（mg/h/g）= (A585+0.0143) ÷2.3575×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)
=1.91×（A 585 +0.0143）÷W
V 反总：反应体系总体积，0.36mL；V 样：反应体系中样本体积，0.08mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；W：样本质量，g
2、 按照蛋白浓度计算
酶活定义：37℃条件下，每毫克蛋白每小时分解几丁质产生1mg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活单位。
几丁质酶活性（mg/h/mg prot）=(A585+0.0143) ÷2.3575×V 反总÷(V 样×Cpr)
=1.91×（A 585 +0.0143）÷ Cpr
V 反总：反应体系总体积，0.36mL；V 样：反应体系中样本体积，0.08mL；Cpr：蛋白浓度，mg/mL；
3、按照细胞数量计算
酶活定义：37℃条件下，每104个细胞每小时分解几丁质产生1mg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活单位。
细胞几丁质酶活性（mg/h/104cell）=(A585+0.0143)÷2.3575×V反总÷(V样÷V样总×细胞数量)=1.91×（A 585 +0.0143）÷细胞数量
4、按照液体体积计算
酶活定义：37℃条件下，每毫升培养液每小时分解几丁质产生1mg N-乙酰氨基葡萄糖的酶
量为一个酶活单位。
几丁质酶活性（mg/h/mL）=(A585+0.0143) ÷2.3575×V 反总÷V 样=1.91×（A 585 +0.0143
b.用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y=1.1788x-0.0143，R2=0.9989
计算公式：
1、按照样本重量计算
酶活性定义：37℃条件下，每克组织每小时分解几丁质产生 1mg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量
为一个酶活性单位。
几丁质酶活性（mg/h/g）=(A585+0.0143) ÷2.3575×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)
=3.82×（A 585 +0.0143）÷W
V 反总：反应体系总体积，0.36mL；V 样：反应体系中样本体积，0.08mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；W：样本质量，g2、按照蛋白浓度计算
酶活定义：37℃条件下，每毫克蛋白每小时分解几丁质产生 1mgN-乙酰氨基葡萄糖的酶量
为一个酶活单位。
几丁质酶活性（mg/h/mg prot）=(A585+0.0143) ÷2.3575×V 反总÷(V 样×Cpr)
= 3.82×（A 585 +0.0143）÷ Cpr
V 反总：反应体系总体积，0.36mL；V 样：反应体系中样本体积，0.08mL；Cpr：蛋白浓度，
mg/mL；
3、按照细胞数量计算
酶活定义：37℃条件下，每104个细胞每小时分解几丁质产生1mg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活单位。
几丁质酶活性（mg/h/104cell）=(A585+0.0143) ÷2.3575×V 反总÷(V 样÷V 样总×细胞数量)=3.82×（A 585 +0.0143）÷细胞数量
4、按照液体体积计算
酶活定义：37℃条件下，每毫升培养液每小时分解几丁质产生 1mg N-乙酰氨基葡萄糖的酶
量为一个酶活单位。
几丁质酶活性（mg/h/mL）=(A585+0.0143) ÷2.3575×V 反总÷V 样= 3.82×（A 585 +0.0143）
注意事项：
1、 反应结束后立即进行比色。
2、 OD 值大于 0.8，样品适当稀释再测定，注意计算公式里乘以稀释倍数；或者缩短 37℃水浴时间到 x 小时（如 0.5 小时），按照原先计算公式得到的结果再除以 x。
3、 试剂四有一定的毒性，请操作时做好防护措施。
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