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超氧阴离子(Oxygen free radical)试剂盒

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    意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

生物体内超氧阴离子等活性氧具有免疫和信号传导的作用,但积累过多时会对细胞膜及生物大分子产生破坏作用导致体细胞和组织代谢异常,从而引起多种疾病。

测定原理

超氧阴离子盐酸羟胺反应生成NO2NO2在对氨基苯磺酸和α-萘胺的作用下,生成红色的偶氮化合物,530nm有特征吸收峰,根据ΔA值可以计算样品中O2含量,反应式为NH2OH + 2O2 H → NO2  H2O2 H2O

自备实验用品及仪器

天平、水浴锅、离心机、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿、氯仿和蒸馏水。

试剂组成和配制
提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:液体25mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:液体20mL×1瓶,4℃避光保存。

试剂三:液体20mL×1瓶,4℃避光保存。

试剂四:氯仿,自备。

超氧阴离子提取

1. 植物、动物组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆,然后10000g4℃,离心20min,取上清置于冰上待测。。

2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~10001的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min然后10000g4℃,离心20min取上清置于冰上待测。

3. 血清或培养液:直接测定。

测定操作表

 

空白管

测定管

样本μL

 

500

提取液μL

500

 

试剂一μL

400

400

混匀,37℃水浴20min

试剂二μL

300

300

试剂三μL

300

300

混匀,37℃水浴20min

试剂四μL

500

500

混匀,8000g25℃,离心5min,小心吸取上层水相1mL1mL玻璃比色皿,蒸馏水调零,测定A530。ΔA=A测定-A空白,空白管只要做一管。

 

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