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铜蓝蛋白(Ceruloplasmin)测定试剂盒

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   意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

铜蓝蛋白是血浆的含铜蛋白,有运输铜的功能,同时具有氧化酶的活性,是细胞外液重要的抗氧化剂。

 

测定原理

铜蓝蛋白催化3,3,5,5-四甲基联苯胺生成蓝色产物,在645nm处有特征吸收峰,依此可得铜蓝蛋白活性。

 

自备实验用品及仪器

天平、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿和蒸馏水。

 

试剂组成和配制

试剂一:液体15mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:液体10mL×1瓶,4℃保存。

试剂三:液体20mL×1瓶,4℃避光保存。(使用前37℃预热)

 

测定操作表

1、 血清(浆)等液体样本:直接检测。

2、 动植物组织样本:称取约0.1g组织,加入1mL蒸馏水,进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

 

空白管

测定管

样品µL

100

100

试剂一µL

300

300

试剂二µL

200

 

混匀,37℃预热5min

试剂三µL

400

400

混匀,37℃反应30min

试剂二µL

 

200

混匀,25℃放置5min1 mL玻璃比色皿,空白管调零,测定OD645

 

计算公式

1、 按体积计算

单位定义:37℃条件下,每分钟每毫升样品与底物作用吸光值升高0.01为一个酶活单位。

Cp活力(U/mL×V反总÷V样÷T=33.33×OD645

2、 按鲜重计算

单位定义:37℃条件下,每分钟每克样品与底物作用吸光值升高0.01为一个酶活单位。

 

Cp活力(U/g鲜重)=×V反总÷(W×V样÷V样总)÷T=33.33×OD645÷W

3、 按蛋白浓度计算

单位定义:37℃条件下,每分钟每毫克蛋白样品与底物作用吸光值升高0.01为一个酶活单位。

Cp活力(U/mg prot=×V反总÷(Cpr×V样)÷T=33.33×OD645÷Cpr

V样:0.1 mLV总:1 mLT:反应时间,30minV样总:加入提取液体积,1mL Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mLW:样质量,g

 

注意事项

试剂二和试剂三有一定的毒性和刺激性,请操作时做好防护措施。

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