羟自由基清除能力测试盒

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注 意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

羟自由基作用于体内蛋白质、核酸、脂类等生物分子，造成细胞结构和功能受损，进而导致体内代谢紊乱引起疾病。羟自由基清除能力是样品抗氧化能力的重要指标之一，在抗氧化类保健品和药品研究中得到广泛应用。

测定原理：

H₂O₂/ Fe²⁺通过Fenton反应产生羟自由基，将邻二氮菲- Fe²⁺水溶液中Fe²⁺氧化为Fe³⁺ ，导致536nm吸光度下降，样品对536nm吸光度下降速率的抑制程度，反映了样品清除羟自由基的能力。

自备实验用品：

可见分光光度计、恒温水浴锅、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。

试剂组成和配制：

提取液：液体50 mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体16mL×1瓶，4℃避光保存。

试剂二：液体8 mL×1瓶，4℃避光保存。

试剂三：液体16mL×1瓶，4℃保存。

试剂四：液体9mL×1瓶，4℃保存。

样品的制备：

1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2. 血清、果汁等液体样品可直接测定。

3. 提取物（或者药物）可配制成一定浓度，如5 mg/mL。

操作步骤：

1、分光光度计预热30min，调节波长至536nm，蒸馏水调零。

2、工作液配制：使用之前按照每管试剂一：试剂二：试剂三=300:150:300（µL）的比例配制，用多少配多少，混匀。

3、在EP管中加入如下试剂

	空白管	对照管	测定管
工作液（µL）	750	750	750
混匀，防止局部颜色过浓
样品（µL）			150
试剂四（µL）		150	150
H₂O（µL）	300	150
混匀、37℃保温60min，8000g 25℃离心5min，吸取1mL于1mL玻璃比色皿中测定536nm处吸光值，空白管、对照管和测定管的吸光值分别记为A空、A对和A测。