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葡萄糖检测试剂盒(Folin-Wu比色法)

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葡萄糖检测试剂盒(Folin-Wu比色法)

 

一、产品简介:

葡萄糖(Glucose, Dextrose,Glu)又称玉米葡糖,简称葡糖,化学式C;H1zO6,分子里为180.16,是自然界分布最广、最重要的一种单糖,属于多羟基醛。用酶学方法测定葡萄糖是生化检测中的常用方法,最常用的有葡萄糖氧化酶法、己糖激酶法,上述酶学法特点是:1、灵敏度、准确度、精密度均高;2、使用温和的反应条件;3、操作简便;4、适用于自动分析仪,测定葡萄糖亦可通过邻甲苯胺法、苯胺法、联苯胺法等实现。

雅吉生物葡萄糖检测试剂盒(Folin-Wu比色法)检测原理是葡萄糖在加热的碱性环境中铜离子还原成氧化亚铜沉淀,后者使磷钼酸还原成钼蓝,使溶液呈蓝色,颜色深浅与葡萄糖含量成正比,其最高吸收峰为420nm,利用分光光度计测定样品和标准品的吸光度值,通过公式可以计算出样品的葡萄糖含量,可用于人或动物的血清、血浆、脑脊液、细胞、组织细胞培养基等样本中的葡萄糖含量定量测定。

该试剂盒仅用于科研领域,不适用于临床诊断或其他用途。

三、自备材料:

1、蒸馏水、PBS、生理盐水

2、离心管

3、水浴锅

4、分光光度计

四、操作步骤(仅供参考)

1、样本处理

血清、血浆、脑脊液样本从待测样本中分离出的血清或血浆不应有溶血,一般需要去除。蛋白质(即为无蛋白血滤液)后再经检测。取抗凝血1ml,加入7ml蒸馏水和1ml蛋白酸化液,混匀,缓慢加入1ml蛋白沉淀液,边加边摇匀,至出现暗红色蛋白质沉淀,静置10min ,3000g离心5min,取上清液即为无蛋白血滤液,4℃保存备用。

组织样本准确称取适量组织样本,按质量(g)生理盐水或PBS(ml)=1:9的比例,加入生理盐水或PBS,冰浴条件下手动或机械匀浆,2500~3000g离心10min,取上清待用。

细胞样本

a. 取适量的细胞(一般推荐>10以上),1000g 离心10min,弃上清,留取沉淀。

b. PBS或生理盐水清洗1~2次,1000g离心10min,弃上清,留取沉淀。

c. 加入200~300ul的PBS或生理盐水匀浆,冰浴条件下超声破碎细胞,功率300W,每次3~5s,间隔30s,重复3~5次;亦可手动匀浆,制备好的匀浆液不可离心;亦可用1~2% Triton X-100冰浴30~60min,制备好的裂解液不可离心。

2、制备Glu标准应用液(0.55mmol/L )10ul Glu标准储存液(55mmol/L),补加蒸馏水或者无菌水990ul,充分混匀即可。根据需用量,临用前按比例配置,不宜久存。

加入试剂(ml)

空白管

标准管

测定管

蒸馏水

1.5

1

1

Glu标准应用液(0.55mmol/L)

-

0.5

-

无蛋白血滤液或其他待测样本

-

-

0.5

Folin碱性铜溶液

0.5

0.5

0.5

Wu磷钼酸溶液

0.5

0.5

0.5

3、Glu加样按照下表设置空白管、标准管、测定管,溶液应按照顺序依次加入,并注意避免产生气泡,如果样品中的Glu浓度过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。

充分混匀,置于沸水浴煮沸8min,取出,在冷水中冷却,注意不能摇动,静置10min,分别加入3.75ml蒸馏水。

4、Glu测定∶取不大于2ml上述溶液,以空白管调零,用分光光度计在420nm处读取标准管和测定管的吸光度。

五、结果计算

葡萄糖含量(mmol/L)=(测定管吸光度/标准管吸光度)×0.55×10

=(测定管吸光度/标准管吸光度)×5.5

其中10为去蛋白样品的稀释倍数

六、注意事项:

1、待测样本如不能及时测定,应置于2~8℃保存,3天内稳定。

2、上述低温试剂避免反复冻融,以免失效或效率下降。

3、Glu标准应用液临用前按比例配置,不宜久存。

4、如样品吸光度值偏大,则需再次稀释后重新检测。

5、样品中含有蛋白等干扰物质时,须用去蛋白的方法处理后再行检测。

6、煮沸时不能动摇,避免液体溅出。

七、 有效期6个月有效。4℃保存,4℃运输。

 

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