热启动Taq DNA聚合酶

产品简介：

Ø Hot-Start Taq DNA Polymerase是一种仅当温度高于45ºC时才具有DNA聚合酶活性的Taq DNA Polymerase(简称Taq酶)与其可逆抑制剂的混合物，俗称热启动Taq酶或HS Taq酶。使用本产品进行PCR反应时可以在室温操作，并能有效避免室温操作时由于普通Taq酶或其它耐热DNA聚合酶存在活性而导致的非特异性PCR背景。

Ø Hot-Start Taq DNA Polymerase是Taq酶与其可逆性抑制剂的混合物。该抑制剂可以可逆性地结合于Taq酶活性位点，当温度低于45ºC时，形成非活性的Taq酶和抑制剂的复合物，从而抑制Taq酶的活性。在常规PCR反应过程中，当温度升高至45ºC或以上时，Taq酶和其可逆性抑制剂解离，从而发挥其正常的DNA聚合酶活性。上述机制使Hot-Start Taq DNA Polymerase仅在加热到45ºC或以上时才会有酶活性，从而确保了小于45ºC时不会发生非特异性的DNA聚合反应，有效降低了PCR的非特异性背景，提高了PCR反应的准确性和精确性。

Ø 常规的DNA分离纯化操作，例如PCR纯化试剂盒或DNA凝胶回收试剂盒和乙醇沉淀等操作，都能有效去除本产品中的抑制剂，以避免可能的对于后续反应的干扰。

Ø Hot-Start Taq DNA Polymerase使用时无需额外的高温孵育步骤以释放Taq酶活性。

Ø Hot-Start Taq DNA Polymerase和普通的Taq DNA Polymerase一样，可以催化5'至3'方向的依赖于DNA模板的DNA的聚合反应，没有3'至5'的外切酶活性，最终会导致PCR产物的3'末端产生3'-dA overhangs，即产生带一个A的3'粘端，可直接用于TA 克隆。

Ø 来源：本产品使用的Taq DNA polymerase为recombinant Taq DNA Polymerase，通过大肠杆菌表达纯化获得，和纯化获得的天然Taq DNA Polymerase在各方面的性质相同。

Ø 用途：高背景和有非特异性条带的PCR，高专一性PCR(high-specificity PCR)，高灵敏度PCR，生物芯片分析(microarray analysis)，常规PCR，克隆PCR、TA克隆等，不建议用于荧光定量PCR (qPCR)。

Ø 活性定义：One unit of the enzyme catalyzes the incorporation of 10 nmol of deoxyribonucleotides into a polynucleotide fraction (adsorbed on DE-81) in 30 min at 70ºC. Enzyme activity is assayed in the following mixture: 67 mM Tris-HCl (pH 8.8 at 25ºC), 6.7 mM MgCl2, 1 mM 2-mercaptoethanol, 50 mM NaCl, 0.1 mg/ml BSA, 0.75 mM activated calf thymus DNA, 0.2 mM of each dNTP, 0.4 MBq/ml 

Ø 纯度：不含DNA内切酶、外切酶和磷酸酯酶，不含RNA酶，满足常规PCR反应要求。

Ø 酶储存溶液：20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 100 mM KCl, 0.5% (v/v) Nonidet P40, 0.5% (v/v) Tween 20 and 50% (v/v) glycerol。

Ø 10X Hot-Start PCR Buffer：100 mM Tris-HCl (pH 8.8 at 25ºC), 500 mM KCl, 15mM MgCl2, 0.8% (v/v) Nonidet P40。

Ø 失活或抑制：酚氯仿抽提可以使Hot-Start Taq DNA Polymerase失活，加入脱氧胆酸钠至0.06%，SDS至0.01%，或sarkosyl至0.02%均可以抑制Hot-Start Taq DNA Polymerase。

Ø 本产品用于50微升的PCR反应体系，足够用于800个反应；用于20微升的PCR反应体系，足够用于2000个反应。

保存条件：-20ºC保存。

注意事项：

Ø 由于PCR反应非常灵敏可以扩增目的基因序列超过1000万倍，在使用Hot-Start Taq Polymerase时请注意避免微量待扩增DNA的污染，并尽量考虑设置不加模板的空白对照以确认是否有待扩增DNA的污染。

Ø Hot-Start Taq DNA polymerase在PCR过程中每循环的出错几率约为2.2×10-5，对于大于1kb的DNA片段的克隆推荐使用出错几率更低的DNA聚合酶，例如Pfu DNA polymerase、BeyoTaq DNA polymerase等。对于普通的PCR或RT-PCR定性检测或定量检测，Hot-Start Taq DNA polymerase是最佳选择。

Ø 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

Ø 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：

1. PCR反应体系的设置：

a. 融解并混匀PCR反应所需的各种溶液。将Hot-Start Taq DNA Polymerase置于冰浴上或冰盒内。

b. 参考下表在冰浴上设置PCR反应体系(如果有多个类似的PCR反应，可以先配制大体积的包含水、buffer、dNTP和Hot-Start Taq酶的混合物，然后分装到各PCR反应管内。根据情况，有时混合物中可以包括引物)：

注意：

a.通常引物的终浓度为0.2μM时可获得良好的检测效果，也可以根据情况在0.1-1.0μM范围内调整引物的终浓度。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可

 降低引物浓度。

b.对不同类型的模板在50µl反应体积中推荐用量如下：哺乳动物基因组DNA：0.1-1µg；大肠杆菌基因组DNA：10-100ng；质粒DNA：0.1-10ng。过多的模板DNA容易导致非特异性PCR产物

c. 用移液器轻轻吹打混匀或轻微Vortex混匀，室温离心数秒，使液体积聚于管底。

d. 如果所使用的PCR仪有热盖则省略本步骤。如果PCR仪没有热盖，则在管内滴入一滴矿物油(mineral oil，ST275)。

e. 把设置好的PCR反应体系置于PCR仪上，开始PCR反应。

2. PCR反应参数的设置可以参考如下示例：

STEP1(起始变性): 94ºC 3min

STEP2(变性): 94ºC 30sec STEP3(退火): 55ºC 30sec STEP4(延伸): 72ºC 1min

STEP5(循环): Go To STEP2 for 30 cycles STEP6(最终延伸): 72ºC 10min

STEP7(临时保存): 4ºC forever

注意：

a. PCR反应的设置需根据模板、引物、PCR产物的长度和GC含量等条件的不同设定不同的PCR反应条件包括温度、时间和循环数等。

b. STEP4(延伸)的时间设置需根据PCR产物的长度进行设置，通常每kb产物的延伸时间为1分钟。例如PCR产物的长度为 1kb，则延伸时间可以设置为1分钟，PCR产物的长度为2kb，则延伸

时间可以设置为2分钟，以此类推。

c. 对于初次进行的PCR，为尽量确保可以扩增出预期的PCR产物，可以把循环数设置为35。对于需进行半定量反应循环数一定要进行适当优化，使PCR反应没有达到平台期。