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pcDNA3.1-SARS-CoV-2-M-Myc

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 pcDNA3.1-SARS-CoV-2-M-Myc是自行研发的哺乳动物细胞表达质粒,用于表达C端带有Myc标签(EQKLISEEDL)的新冠病毒(SARS-CoV-2)毒膜(Membrane, M)蛋白,可以使用抗Myc标签的抗体来识别M蛋白的表达,或进行免疫共沉淀分析等。该质粒含有CMV启动子,可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达,质粒为氨苄青霉素抗性。

M蛋白是冠状病毒四个结构蛋白之一,由M基因编码,含有3个跨膜结构域和一个保守结构域。M蛋白是一种跨膜糖蛋白(membrane glycoprotein),大部分结构陷于膜内。M蛋白N-端亲水性末端突出于膜的外表面,C-端亲水区位于病毒粒子内部,能与病毒衣壳相互作用。M蛋白主要参与病毒组装,促进膜弯曲(curvature)以及结合至核衣壳(nucleocapsid)上。M蛋白的保守结构域对于病毒装配非常重要,主要通过M-M、M-S和M-N蛋白相互作用,参与病毒复制装配和出芽。此外,SARS-CoV M蛋白还能抑制I型干扰素的产生。

pcDNA3.1-SARS-CoV-2-M-Myc质粒的主要信息如下:

Feature Nucleotide Position
CMV promoter 232-819
T7 promoter and T7 primer binding site 863-882
Multiple cloning site 895-922
M protein 923-1589
Myc-tag 1589-1618
BGH pA 1665-1889
f1 origin of ss-DNA replication 1935-2363
SV40 promoter 2368-2711
Neomycin resistance ORF 2773-3567
SV40 polyA signal 3741-3871
pUC origin 4254-4924
Ampicillin resistance ORF 5069-6065
bla promoter 5964-5970

pcDNA3.1-SARS-CoV-2-M-Myc质粒(6065bp)的图谱如下:

pcDNA3.1-SARS-CoV-2-M-Myc的多克隆位点的详细图谱见说明书:

pcDNA3.1-SARS-CoV-2-M-Myc中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pcDNA3.1-SARS-CoV-2-M-Myc)包括:

AfeI AleI AscI AsiSI BaeI BamHI BbvCI
BmgBI BsgI BsmBI BspDI BspEI BstEII BstXI
Bsu36I ClaI EcoNI EcoRI EcoRV Esp3I FseI
HpaI NotI PacI PmlI PshAI SacII SbfI
SfiI SrfI SwaI XcmI      

pcDNA3.1-SARS-CoV-2-M-Myc中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pcDNA3.1-SARS-CoV-2-M-Myc)包括:

Acc65I G`GTAC,C 917 NdeI CA`TA,TG 1161
AflII C`TTAA,G 908 NheI G`CTAG,C 1279
AgeI A`CCGG,T 1151 NruI TCG|CGA 1319
AhdI GACNN,N`NNGTC 5142 PaeR7I C`TCGA,G 1420
ApaI G,GGCC`C 1638 PciI A`CATG,T 1420
AvrII C`CTAG,G 2691 PflFI GACN`N,NGTC 1500
BcgI ,NN`(N)10CGA(N)6TGC(N)10,NN` 5647 PflMI CCAN,NNN`NTGG 1656
BglII A`GATC,T 12 PluTI G,GCGC`C 484
BlpI GC`TNA,GC 1199 PpuMI RG`GWC,CY 895
BmtI G,CTAG`C 899 PspOMI G`GGCC,C 208
Bpu10I CC`TNA,GC 180 PspXI VC`TCGA,GB 1622
BsaBI GATNN|NNATC 2760 PstI C,TGCA`G 2954
BseRI GAGGAG(N)8,NN` 2687 PvuI CG,AT`CG 5512
BsiWI C`GTAC,G 1235 RsrII CG`GWC,CG 3417
BsmI GAATG,CN` 3821 SacI G,AGCT`C 818
BsrGI T`GTAC,A 1582 ScaI AGT|ACT 5622
BssHII G`CGCG,C 3298 SexAI A`CCWGG,T 2458
BstBI TT`CG,AA 3583 SfoI GGC|GCC 2902
BstZ17I GTA|TAC 3873 SgrAI CR`CCGG,YG 1151
CspCI ,NN`(N)11CAA(N)5GTGG(N)10,NN` 626 SmaI CCC|GGG 2714
DraIII CAC,NNN`GTG 2168 SnaBI TAC|GTA 590
EagI C`GGCC,G 2807 SpeI A`CTAG,T 249
Eco53kI GAG|CTC 816 StuI AGG|CCT 2690
HindIII A`AGCT,T 911 TspMI C`CCGG,G 2712
KasI G`GCGC,C 2900 Tth111I GACN`N,NGTC 3019
KpnI G,GTAC`C 921 XhoI C`TCGA,G 1622
MfeI C`AATT,G 161 XmaI C`CCGG,G 2712
NarI GG`CG,CC 2901      

pcDNA3.1-SARS-CoV-2-M-Myc质粒中推荐使用的测序引物序列如下:

pcDNA3.1 primer (829-848): 5'- CTAGAGAACCCACTGCTTAC -3'

BGH pA primer (1659-1676): 5'- TAGAAGGCACAGTCGAGG -3'

pcDNA3.1-SARS-CoV-2-M-Myc的全序列信息

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D2941-1μg pcDNA3.1-SARS-CoV-2-M-Myc 1μg
D2941-100μg pcDNA3.1-SARS-CoV-2-M-Myc 100μg
说明书 1份
保存条件:

-20℃保存。

注意事项:

本质粒未经书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明:
1. 首次使用1μg包装的本产品时,请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2. 100μg包装的本产品质粒浓度为0.1μg/μl,共1ml。可以直接用于酶切或者转染细胞。

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