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cDNA 第二链合成试剂盒

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 cDNA 第二链合成的原理是用 RNase H 使 RNA-DNA 杂合链中的 RNA 生切口,再用 DNA Polymerase I 通过切口平移(nick translation)反应进行RNA 链取代合成 cDNA 第二链,

本产品具有下列特点:

1. 即开即用,含有合成 cDNA 第二链的所有试剂包括 RNase HE.coli DNA聚合酶 1 DNA ligase

2. 一管式操作,不需要每次进行纯化,不丢失宝贵样品。

3. 所得双链 cDNA 可以直接用于后续的常规 PCRreal-time PCRcDNA文库构建、抑制性差减杂交等。

 

本试剂盒足够 30  80uL 体系的 cDNA 第二连合成反应。

 

成分

编号

十孔盒包装

5×cDNA 第二链合成缓冲液

131005a

250 μL

20×cDNA 第二链合成酶混合液

131005b

60 μL

0.5 M EDTA 溶液

130309

60 μL

超纯水

100935

1 mL

使用手册

131005sc

1

 

低温运输,-20保存,有效期一年

 

cDNA 第一链合成试剂等

一、合成 cDNA 第一条链

本试剂盒不提供 cDNA 第一链合成试剂,用户需自备相关试剂合成 cDNA

第一链。

二、合成 cDNA 第二链

 

1. 在冰浴上向 5uL 已经完成 cDNA 第一条链合成的反应体系逆转录体系 中依次加入下表试剂,如果多于 5uL,请只取用 5uL

注:克隆双链 cDNA 一般需要平末端化,需要此步处理。PCRSSH 等后续处理一般不需要把双链 cDNA 平末端化,则可以跳过T4 DNA 聚合酶处理步骤, 直接用 EDTA 终止反应。

1. 电泳 5 μL 检测 cDNA 质量。如果 cDNA  0.5-10Kb 的范围内呈模糊一片,则 cDNA 合格。如果没看见 cDNA 或有其他异常,需查找原因后再继续。

2. 所得 cDNA 可以直接用于后续的常规 PCRreal-time PCRcDNA 文库

 

构建、抑制性差减杂交(SSH)等实验

 

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