小鼠单克隆抗体亚型鉴定试剂盒

规格

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产品组成：

Catalog No. PK20002	*296孔**	*596孔**
酶标板(Microplate) 预包被了针对小鼠 IgG1，IgG2a，Ig G2b， IgG2c， IgG3，IgM，kappa light chain，lambda lig ht chain 的特异性抗体	2 块	5 块
封板膜(Plate Cover seals)	2 张	5 张
20×PBST	15 mL	20 mL×2
100×羊抗鼠 IgM+IgG-HRP (Goat Anti-Mouse IgM+IgG- HRP)	120 μL	300 μL
显色液 (TMB Substrate) A 液	240 μL	600 μL
显色液 (TMB Substrate) B 液	24 mL	30 mL×2
终止液 (Stop Solution)	24 mL	30 mL×2

使用方法

1. 材料准备

从 4°C 中取出 Mouse 单克隆抗体亚型鉴定试剂盒，室温条件下平衡 30 分钟。

a.1×PBST : 10 mL 20×PBST + 190 mL 超纯水

b.酶标板条 : 根据样本数量选取酶标板条数（测定 1 个样本需要 1 条酶标板条），余下板条置于密封袋中，4°C 保存。

c.1×羊抗鼠 IgM+IgG-HRP : 10 μL 100×羊抗鼠 IgM+IgG-HRP + 990 μL 1×PBST

2.样本准备

a.杂交瘤细胞上清 : 将样本以 1×PBST 1:100 稀释，例如 10 μL 杂交瘤细胞上清 + 990 μL 1×PBST。推荐稀释范围为 1:20-1:200。

b.腹水 : 将样本以 1×PBST 1:100000 稀释，例如 1 μL 腹水 + 1 mL 1×PBST（1:1000），再取上述混合液 5 μL + 495 μL 1×PBST。推荐稀释范围为 1:50000-1:200000。

c.纯化抗体 : 将样本以 1×PBST 稀释至 200 ng/mL，推荐稀释浓度为 20 ng/mL-1 μg/mL。

3.单克隆抗体亚型鉴定

a.将待测样本适当稀释加入板条样品孔中，50 μL/孔。

b.无需孵育，将 1×羊抗鼠 IgM+IgG-HRP 加入样品孔中，50 μL/孔。混匀器上轻轻混匀，也可用手轻轻敲击板架两侧 1 min。

c.盖上封板膜，室温孵育 1 h。

d.弃去孔内液体，1×PBST 洗板 3 次，吸水纸上拍干。

e.将现配的显色液加入孔中，100 μL/孔。

注：显色液配方， A液： B 液=1:100，即 10μLA液与 1 mLB 液混合，混匀后立即使用。

f.室温避光显色 10-20 min。每孔加入终止液，100 μL/孔。

g.结果判读。结果可以对照下图以肉眼判定，也可以通过酶标仪读取 OD450。颜色最深或是 OD 值最高孔对应的即为相应亚型。

注：每个样本应该在 A-F 中有一个阳性孔（即是样本重链类型）， G和 H中有一个阳性孔

（即是样本轻链类型）。