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精子核 DNA 染色液(AO 法)
正常情况下与精核 DNA 结合的碱性蛋白(核蛋白)将经历从组蛋白到鱼精蛋白的自然成
熟过程，这种成熟后的鱼精蛋白对精子基因(DNA)具有特殊保护作用，组蛋白被鱼精蛋白逐渐
取代的过程，称之为精子核蛋白组型转换，这种组型转换具有重要的生理意义。精子核携带着
全部来自父方的遗传信息，这些基因必须在受精后才能开始表达，受精前精子基因在鱼精蛋白
的特殊保护下紧密浓集，无任何 DNA 转录作用。但当核蛋白组型转换异常可引起男性不育
或胚胎早期夭折流产，其机理为：①精子 DNA 不稳定且易受损伤而难以受孕；②一旦受
精，由于核蛋白组型异常，精子核不能正常解聚，从而影响了雌雄原核的融合；③胚胎不能正
常发育，造成胚胎夭折而流产。
正常精子核约占其头部的 65％，由结合蛋白的 DNA 构成，精子核DNA 染色液(AO 法)
作用原理是荧光染料吖啶橙与双链 DNA 结合发出绿色荧光，与单链 DNA 结合后可发出红
色或黄色荧光，通常有双链 DNA 的精子才能有受精能力。该试剂仅用于科研领域，不适用
于临床诊断或其他用途。
产品组成：
编号
名称
DA1210
20T
Storage
试剂(A): 洗涤液
100ml
RT
试剂(B): 固定液
50ml
RT 避光
试剂(C): AO 染色液
1ml
4℃ 避光
试剂(D): AO Buffer
5ml
4℃
试剂(E): 抗荧光淬灭封片剂
5ml
4℃ 避光
说明书
1 份
自备材料：
1、蒸馏水
2、新鲜精液样本
3、 EP 管或离心管
4、恒温箱
5、防脱载玻片操作步骤(仅供参考)：
1、取新鲜精液标本，置于恒温箱
37℃或常温放置，至完全液化。
2、取上述液化精液 0.2~0.5ml 置于 EP 管，再加入 1~1.5ml 洗涤液，用吸管或移液器反复
吹打数次，室温 2000rpm 离心 5~10min，弃去上清液，保留管底精子沉淀团，重复操作
1~2 次。
3、向精子沉淀加入洗涤液约
0.05~0.2ml，制成混合精子悬液。
4、取上述已制备好的精子悬液
15~100μl，均匀涂布于防脱载玻片，自然干燥。
5、在涂片区内滴加固定液 2~3 滴，室温固定 10~15min，蒸馏水稍洗，并甩去多余水分。
6、配制 AO 染色工作液：按 AO 染色液：AO Buffer=1：4 的比例混合，即为 AO 染色工
作液，注意该工作液应即配即用，不宜久置。
7、在涂片区内滴加 AO 染色工作液 2~4 滴，室温染色 5min，蒸馏水稍洗，并甩去多余水
份。
8、吹干或晾干玻片，滴加 2~4 滴抗荧光淬灭封片剂，荧光显微镜下观察。
结果：
注意事项：
1、蒸馏水冲洗载玻片时要注意控制水流速度，以免洗脱涂片区内的精子。
2、甩去多余水分，应防止涂片过于干燥。
3、配制的 AO 染色工作液应即配即用，不宜久置，否则荧光会衰减，如果荧光明显衰减可
提高 AO 染色液：AO Buffer=1：4 配制比例，以达到较好的效果。
4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：6 个月有效；4℃运输，4℃保存。
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