您好,欢迎光临上海雅吉生物商城!
工作时间:9:00-18:00
全国服务热线:021-34661276

雪貂鼻腔粘膜上皮细胞永生化

规格
价格库存
订购热线:021-34661276
我要询价
  • 商品详情
  • 售后服务
  • 相关文献

 细胞培养步骤

a、细胞传代如果未超过80%汇合度时,将瓶装的完全培养液收集至离心管中,留5ml完全培养基,放入37℃、5%CO2孵箱培养;如果细胞密度80%,即可进行传代培养传代具体步骤如下:

1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2min,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加5ml以上完全培养基终止消化。

3.轻轻吹打细胞,使之完全脱落后吸出,然后将悬液转移至15ml离心管中,1000RPM条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL完全培养重悬

4. 将细胞悬液按1:2的比例进行分瓶传代(两个T25瓶),补充新的完全培养基至5-8ml/瓶最后放入到37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。

b、细胞冻存:

1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃T25培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次;

2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化,再轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中,1000rpm离心 5min;

3、 弃上清,沉淀细胞加入1ml的雅吉生物无血清冻存液(货号:C7001),混匀后加入冻存管中。

4、 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱即可,如后期将细胞转入液氮罐中,需在-80℃冰箱 存放24小时以上转入液氮罐中。

C、细胞复苏:

1、从液氮中取出细胞冻存管(注意佩戴防护面具),快速将其置入 37℃水浴中解冻, 直至冻存管中无结晶,然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁;

2、将冻存管中的细胞移至含 5ml 完全培养基的15ml离心管中,1000rpm离心5min;

3、弃上清,沉淀用5ml完全培养基重悬,接种T25培养瓶,37℃,5%CO2细胞培养箱中培养;

4、第二天,换用新鲜完全培养基继续培养。

我要询价
*联系方式:
(可以是QQ、MSN、电子邮箱、电话等,您的联系方式不会被公开)
*内容:


微信客服
扫一扫立即咨询


微信客服
扫一扫立即咨询

销售电话:

021-34661275

021-34661276

15301693058