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谷胱甘肽S-转移酶(GST)试剂盒

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    意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

GST是一种具有多种生理功能的蛋白质家族,主要存在于细胞质内。GST是体内解毒酶系统的重要组成部分,主要催化各种化学物质及其代谢产物与GSH的巯基共价结合,使亲电化合物变为亲水物质,易于从胆汁或尿液中排泄,达到将体内各种潜在或具备毒性的物质降解并排出体外的目的。因此,GST在保护细胞免受亲电子化合物的损伤中发挥着重要的生物学功能。此外,因为GST具有GSH-Px活性,亦称为non-Se GSH-Px,具有修复氧化破坏的大分子如DNA、蛋白质等的功能。注意,GST催化的反应减少GSH含量,但是不增加GSSG含量。


测定原理:

GST催化GSHCDNB结合,其结合产物的光吸收峰波长为340nm;通过测定340nm波长处吸光度上升速率,即可计算出GST活性。


自备仪器和用品

紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1mL石英比色皿和蒸馏水。


试剂组成和配置:

试剂一:液体50mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:液体45mL×1瓶,4℃保存。

试剂三:粉剂×1瓶,4℃保存。临用前加5 mL蒸馏水溶解。


粗酶液提取

1. 组织:按照组织质量(g试剂一(mL)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆。8000g4离心10min,取上清置冰上待测。

2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~10001的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后8000g4,离心10min,取上清置于冰上待测。

3.  血清等液体:直接测定。


测定操作

1. 分光光度计预热30 min,调节波长到340 nm,用蒸馏水调零。

2. 试剂三放在25℃(一般物种)或者37℃(哺乳动物)保温。

3. 测定管:取1mL石英比色皿,加入100μL上清液,900μL试剂二和100μL试剂三,迅速混匀后于340nm测定吸光度变化,记录10 s310 s吸光度为A1A2

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