试验前请仔细阅读说明书,本产品仅供科研实验使用。
1. 所购产品均质量保证!
2. 试剂盒方面提供技术指导,Elisa试剂盒还可以提供代检测服务。
3.本公司出售的任何产品均保质保量,除以下情况,客户可联系我公司申请退换货售后服务
以下情况不予办理退换货:
1、已超过受理期限的产品,如过保质期。
2、由于客户自身操作原因导致实验失败。
3、由于客户没有仔细确认要订购的指标,导致自己的指标定错。
4、产品已使用(质量问题除外)。
注 意 :正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
L-半乳糖途径是合成AsA的主要途径。Gal LDH位于线粒体内膜,负责催化植物体内AsA生物合成的最后一步,也是该途径的关键酶之一,对植物体内AsA含量的积累起着至关重要的作用。
测定原理:
Gal LDH催化L-半乳糖内酯还原细胞色素c(Cyt c),还原型Cyt c在550nm有吸收峰;测定还原型Cyt c增加速率,来计算Gal LDH活性。
自备仪器和用品:
台式离心机、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:液体50mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存。临用前加入40mL蒸馏水,充分溶解。
试剂三:粉剂×1瓶,4℃保存。临用前加入5mL蒸馏水,充分溶解。
粗酶液提取:
按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆。13000g,4℃离心10min,取上清置冰上待测。
Gal LDH测定操作:
1. 分光光度计预热30 min,调节波长到550nm,蒸馏水调零。
2. 试剂二在25℃水浴锅中预热30 min。
3. 依次在1mL玻璃比色皿中加入100μL上清液、800μL预热的试剂二和100μL试剂三,迅速混匀后于550nm比色,记录10s和130s的吸光值A1和A2,△A = A2﹣A1。
Gal LDH活性计算公式:
(1). 按蛋白浓度计算
Gal LDH活性单位定义:25℃中每毫克蛋白每分钟还原1nmol Cyt c 为1个酶活单位。
Gal LDH (nmol/min/mg prot) = △A÷ε÷d×V反总×109÷(Cpr×V样)÷T
=289×△A ÷Cpr
(2). 按样本质量计算
Gal LDH活性单位定义:25℃中每克样品每分钟还原1nmol Cyt c 为1个酶活单位。
Gal LDH (nmol/min/g鲜重) = △A÷ε÷d×V反总×109÷(W×V样÷V样总)÷T
=289×△A ÷W
ε:还原型Cyt c摩尔消光系数,17.3×103L/ mol/cm;d:比色皿光径(cm),1cm;V反总:反应体系总体积,1mL=0.001 L;109:1mol=1×109nmol;V样:加入反应体系中上清液体积,100μL=0.1mL;Cpr:上清液蛋白浓度,mg/mL,蛋白质浓度需要另外测定,建议使用本公司蛋白质含量BCA试剂盒;V样总:加入提取液体积,1mL;W,样本质量,g;T:反应时间,2min。
试验前请仔细阅读说明书,本产品仅供科研实验使用。
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