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单宁含量检测试剂盒

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     意:正式测定前取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

单宁是一类广泛存在于植物体内的多元酚化合物,又称植物多酚。具有独特的化学性质和多种生理活性,如能与蛋白质、生物碱、多糖结合;能与多种金属离子发生络合或静电作用;具有止血、抑制微生物、抗过敏、抗突变、抗肿瘤、抗衰老等生理活性。

 

测定原理:

单宁在碱性环境下与磷钼酸反应,生成蓝色化合物,在760nm处有最大吸收峰。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计、水浴、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵和蒸馏水。

 

试剂的组成和配制:

试剂一:液体10 mL× 1瓶,4保存;

试剂液体8 mL × 1瓶,4保存;

 

单宁的提取: 

按照组织质量(g:蒸馏水体积(mL)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL蒸馏水),充分匀浆后转移到EP管中,80℃水浴提取30min 8000 g25℃离心10 min,取上清液待测。

 

测定步骤:

1、分光光度计预热30min以上,调节波长至760nm,蒸馏水调零;试剂一和试剂二37预热10min以上;

2、操作表:

试剂名称(µL

对照管

测定管

样本

 

25

蒸馏水

675

650

试剂一

175

175

混匀,室温静置5min

试剂二

150

150

混匀,室温静置30min760nm处读取吸光值AΔA=A测定-A对照,对照管只要做一管。

 

单宁含量计算:

1、标准条件下测定的回归方程为y = 1.6418x +0.0134x为标准品浓度(mg/mL)yΔA(A测定-A对照)

2、按样本鲜重计算:

单宁含量mg /g鲜重)= [(ΔA-0.0134) ÷1.6418×V1]÷W×V1÷V2=0.609×(ΔA-0.0134) ÷W

3、按样本蛋白浓度计算:

单宁含量(mg/mg prot)= [(ΔA-0.0134) ÷1.6418×V1]÷(V1×Cpr)=0.609×(ΔA-0.0134) ÷Cpr

V1:加入样本体积,0.025mLV2:加入提取液体积,1mL Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mLW:样本鲜重,g

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