试验前请仔细阅读说明书,本产品仅供科研实验使用。
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2. 试剂盒方面提供技术指导,Elisa试剂盒还可以提供代检测服务。
3.本公司出售的任何产品均保质保量,除以下情况,客户可联系我公司申请退换货售后服务
以下情况不予办理退换货:
1、已超过受理期限的产品,如过保质期。
2、由于客户自身操作原因导致实验失败。
3、由于客户没有仔细确认要订购的指标,导致自己的指标定错。
4、产品已使用(质量问题除外)。
注 意:正式测定前取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
单宁是一类广泛存在于植物体内的多元酚化合物,又称植物多酚。具有独特的化学性质和多种生理活性,如能与蛋白质、生物碱、多糖结合;能与多种金属离子发生络合或静电作用;具有止血、抑制微生物、抗过敏、抗突变、抗肿瘤、抗衰老等生理活性。
测定原理:
单宁在碱性环境下与磷钼酸反应,生成蓝色化合物,在760nm处有最大吸收峰。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
试剂一:液体10 mL× 1瓶,4℃保存;
试剂二:液体8 mL × 1瓶,4℃保存;
单宁的提取:
按照组织质量(g):蒸馏水体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL蒸馏水),充分匀浆后转移到EP管中,80℃水浴提取30min, 8000 g,25℃离心10 min,取上清液待测。
测定步骤:
1、分光光度计预热30min以上,调节波长至760nm,蒸馏水调零;试剂一和试剂二37℃预热10min以上;
2、操作表:
试剂名称(µL) | 对照管 | 测定管 |
样本 |
| 25 |
蒸馏水 | 675 | 650 |
试剂一 | 175 | 175 |
混匀,室温静置5min
试剂二 | 150 | 150 |
混匀,室温静置30min,760nm处读取吸光值A,ΔA=A测定-A对照,对照管只要做一管。
单宁含量计算:
1、标准条件下测定的回归方程为y = 1.6418x +0.0134;x为标准品浓度(mg/mL),y为ΔA(A测定-A对照)。
2、按样本鲜重计算:
单宁含量(mg /g鲜重)= [(ΔA-0.0134) ÷1.6418×V1]÷(W×V1÷V2)=0.609×(ΔA-0.0134) ÷W。
3、按样本蛋白浓度计算:
单宁含量(mg/mg prot)= [(ΔA-0.0134) ÷1.6418×V1]÷(V1×Cpr)=0.609×(ΔA-0.0134) ÷Cpr。
V1:加入样本体积,0.025mL;V2:加入提取液体积,1mL; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g。
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