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尿素氮(BUN)试剂盒

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     意: 正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

尿素是生物体内含氮化合物分解的终产物,在尿酶催化下分解转化成氨。血液尿素氮是肾功能的主要指标之一。


测定原理

样本中尿素氮在氯化高铁一磷酸溶液中与二乙酰一肟和硫胺脲共煮,生成一种红色的二嗪化合物,其颜色的深浅与尿素氮含量成正比,采用二乙酰一肟法测定尿素氮含量。


自备实验用品及仪器

天平、研钵、常温离心机、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、恒温水浴锅。


试剂组成和配制 

试剂一:液体6mL×1瓶,4℃避光保存,

试剂二:液体60mL×1瓶,4℃避光保存。


样品处理

1. 组织:按照质量(g):蒸馏水体积(mL)15~10的比例(建议称取约0.1g,加入1mL蒸馏水)加入蒸馏水,匀浆后于25℃10000g离心10min,取上清待测。

2. 细胞:按照细胞数量(104个):蒸馏水体积(mL )为500~10001的比例(建议500万细胞加入1mL蒸馏水),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后4℃10000g离心10min,取上清置于冰上待测。

3. 血清或其它液体:直接检测。


测定操作

 

空白管

测定管

样品(μL

 

40

H2OμL

40

 

试剂一(μL

100

100   

试剂二(mL

1000

1000

混匀,沸水浴10min,冷却后,540nm下测定吸光值。△A=A测定-A空白。空白管只要做一管。

 

尿素氮含量计算:

标准条件下测定回归方程为y =2.048x + 0.0229R2 = 0.9943x为标准品浓度(mg/mL),y为吸光值。

1、按照血清(浆)或者细胞培养液体积计算

尿素氮含量(mg/mL)= (A-0.0229)÷2.048=0.4882×(A-0.0229)

2、按照样本质量计算

尿素氮含量mg/g鲜重)= (A-0.0229)÷2.048×V样总÷W=0.4882×(A-0.0229)÷W

3、按照蛋白浓度计算

尿素氮含量(mg/mg prot)= (A-0.0229)÷2.048÷Cpr=0.4882×(A-0.0229) ÷Cpr

V样总:加入提取液体积,1 mLCpr:样本蛋白质浓度,mg/mLW:样本质量,g500:细菌或细胞总数,500万。

 

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