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植物全氮含量测定试剂盒(粗蛋白)

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一.试剂配制

1、标准溶液

盐酸标准溶液[c (HCl)=0.1000 mol/L],移取9 mL 浓盐酸(盐酸浓度36%38%)用蒸馏水稀释并定容至1000 mL容量瓶,摇匀,用无水碳酸钠进行标定。

无水碳酸钠标定方法:50mL蒸馏水,加入10滴溴甲酚绿-甲基红混合指示剂,用配置好的盐酸溶液滴定至溶液由变为暗红色,消耗盐酸体积记为V0;再准确称取经300℃烘干1小时的无水碳酸钠0.2g,精确至0.0001,记为m溶于少量蒸馏水中定容至50mL,加入10滴溴甲酚绿-甲基红混合指示剂,用配置好的盐酸溶液滴定至溶液由绿色变为暗红色,煮沸3分钟,冷却后继续滴定至溶液呈暗红色,消耗盐酸体积记为V

CHCl=m/[(V-V0)*0.05299],其中CHCl)单位为mol/L

240%氢氧化钠溶液1000 ml400 g/L

400g氢氧化钠溶解于1000mL无氨蒸馏水中;

32%浓度硼酸溶液2000 ml 20g/L

分析纯硼酸40g溶于2000ml无氨蒸馏水中;

4、甲基红-溴甲酚绿混合指示剂

A:称取0.1g 甲基红,用无水乙醇定容至100 ml

B:称取0.1g 溴甲酚绿,用无水乙醇定容至100 ml.

临用时按照A:B=1:5混匀。取10ml加入1000ml硼酸溶液中。

5、高锰酸钾溶液:2.5g高锰酸钾溶于50mL蒸馏水中。

6、1:1硫酸溶液:100mL浓硫酸缓慢加入100ml蒸馏水中,边加边搅拌。

二.样品消解

1. 将植物样本粉碎,80℃烘干至恒重,40目筛称取约0.3g,加入消化管中,同时取空消化管两支,用移液管分别往每管中加入10mL浓硫酸,轻轻晃动消化管

2. 20支消化管全部置于石墨消解仪上,盖好盖子,打开废气回收系统以及石墨消解仪,温度设置为:曲线加热100℃10min280℃10min400℃40min

3. 取出消化管冷却至室温,切勿在样品冷却之前开盖。每支消化管中缓慢加入1mL过氧化氢,摇匀,重新

 

放置在石墨消解仪上,温度设置为:曲线加热20010min320℃30min400℃30min

4. 取出消化管冷却至室温,切勿在样品冷却之前开盖。每支消化管中缓慢加入0.5mL过氧化氢,摇匀,重新放置在石墨消解仪上,温度设置为:曲线加热20010min320℃30min400℃60min。若样本未呈现澄清状态,应继续加热至澄清,即消解完全。

5. 关闭石墨消解仪,待样品冷却后关掉废气回收系统。

三.全氮测定

1. 将滴定酸桶,硼酸桶,碱桶,蒸馏水桶管路按照标示插好(滴定酸桶的管子应插到底部),将硼酸桶,碱桶,蒸馏水桶的液位检测插好。

2. 打开定氮仪与循环水系统,进入清洗界面,先进行两次硼酸清洗管路,再进行一次换酸清洗,一次碱管路清洗。

3. 装一只空的消化管,关好防护门。点击【测试】菜单系统自动进入操作模式界面,选择【自动测试】,常规,设置参数为:样品编号;样品重量:0.000g。滴定酸浓度:标定好的盐酸浓度(mol/L);空白值:0.000mL;蛋白系数:样品固定的转换系数。硼酸:15ml;稀释水:20mL;碱液:0mL;蒸馏:5min;设置完成后,点击【确定】即可进入自动测试功能。

4. 测试完成后打印测定结果。

5. 打开安全门,戴棉质手套取出消化管,放入样品空白管,关好防护门。点击【测试】菜单系统自动进入操作模式界面,选择【自动测试】,常规,碱液参数设置为40mL,其余参数同步骤3,重复步骤3

6. 样品测定:设置参数为:样品编号;样品重量:称取的样品实际质量,g。滴定酸浓度:标定好的盐酸浓度(mol/L);空白值:两支空白管滴定用酸量的平均值,mL;蛋白系数:样品固定的转换系数。硼酸:15ml;稀释水:20mL;碱液:40mL;蒸馏:5min;设置完成后,点击【确定】即可进入自动测试功能。

7. 测试完成后打印测定结果。

8. 进行仪器清洗,然后关闭循环水系统及定氮仪,然后清洁仪器。

 

四.注意事项

1. 禁止使用边缘有缺口,或者有裂缝的消化管进行消解,消解时盖子放置好,以免废气泄露,消解仪工作状态尽量不要靠近仪器,但是要经常观察管内变化,若出现异常情况,立即断电。

2. 开始蒸馏时,消化管中液体的总体积以不超过总体积的1/3

3. 拿取消化管时,注意高温烫伤。放置消化管时,左右旋转几下,确保消化管与蒸馏头密封。

 

4. 每日做完实验要用洗瓶冲洗蒸馏头残余碱液,仪器前部的槽皿中,如果积有液体,请擦洗干净

5. 为了延长防溅装置的使用寿命,请每天工作结束后清洗两次左右:即消化管加水150mL空蒸5分钟。(空蒸仪器把加碱量设置为“0”)。

6. 关机前,需将接收杯内液体排净,仪器使用结束后要关闭水源、电源,仪器上要放置一空消化管(防止防溅装置内残留液体流到仪器上)。

7. 做完实验将消解管清洗干净(包括壁内和壁外),然后放烘箱烘干,烘干后若长时不用则收起来。消解仪各部位上若有硫酸残留需及时擦拭干净一面被腐蚀,消解仪盖子以及托盘需长清洗保持洁净。

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