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类胡萝卜素(Carotenoid)检测试剂盒(微板法)

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   意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定

测定意义:

类胡萝卜素是一种脂溶性且具有营养特性的化合物,给植物和动物提供天然色素,是重要的抗氧化剂,并有能力转换为必需维生素。类胡萝卜素可预防细胞,组织和基因损毁,增强身体免疫系统,抵御感染,减少癌症风险,保护心脏。

原理:

样品通过混合有机溶剂萃取,类胡萝卜素与非类胡萝卜素成分分离,在440nm处有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器:

天平、烘箱,100目筛、三角瓶或烧杯、漏斗,纱布、玻璃试管、可见分光光度计/酶标仪、丙酮

试剂组成和配制:

试剂一:液体2L4℃保存。

试剂二:丙酮(自备)1L4℃保存。

提取液:临用前可按照试剂一(V):试剂二(V)= 2:1混匀,封口膜封紧,防止挥发,配置好的提取液4℃保存。

样本处理:

组织样品:60℃烘干粉碎,过 100 目筛,称约 0.2g 于玻璃试管中,加 6mL 提取液,浸提 20min,提取液过滤至烧杯或三角瓶中,反复提取至残渣无色,合并滤液定容至 50mL 待测。
测定操作表:

 

空白管

测定管

样本(μL)

 

1000

提取液(μL)

1000

 

于微量石英比色皿/96 孔板,迅速测定440nm处吸光值A,分别记为A空白管和A测定管,△A=A测定管-A空白管

 

注意:空白管只需测定一次。

计算公式

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

类胡萝卜素含量(μg/g)= △A×V 样总÷(ε×d)÷W×1000

= 20×△A÷W

V 样总:提取液总体积,50mL;ε:类胡萝卜素经验吸光系数,2500;d:比色皿光径,1cm;W:样本质量,g

b. 用 96 孔板测定的计算公式如下

类胡萝卜素含量(μg/g)= △A×V 样总÷(ε×d)÷W×1000

= 40×△A÷W

V 样总:提取液总体积,50mL;ε:类胡萝卜素经验吸光系数,2500;d:96 孔板光径,0.5cm;W:样本质量,g

注意事项

1. 提取液易挥发,有毒性,操作时做好防护措施。

2. 测定必须能迅速,防止挥发造成误差

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