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DB3.1感受态细胞

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 产品简介:

DB3.1 大肠杆菌菌株基因组中含有 gyrA462 基因,赋予其对 ccdB 毒性基因的抗性,特别适用于构 建或扩繁含有 ccdB 基因的质粒载体(例 GATEWAY System vector) ,此菌株具有链霉素抗性。DB3.1 感受态细胞经特殊工艺制作,经 pUC19 检测转化效率>108 cfu/μg DNA。

 

操作说明:

1、DB3.1 感受态细胞放置冰中融化(或放手心或室温片刻,待菌体处于冰水混合状态时迅速插入冰 中),加入目的 DNA 并用指尖轻轻拨打管底混匀(避免用枪吸打),冰上静置 25 分钟。

2、42℃水浴热激 45 秒,迅速放回冰上并静置 2 分钟,晃动会降低转化效率。

3、向离心管中加入 700μl 不含抗生素的 2YT 或 LB 无菌培养基,混匀后 37℃,200 rpm 复苏 60 分钟。

4、5000rpm离心一分钟收菌,留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB 培养基上。

5、将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养。

 

注意事项:

1、感受态细胞最好在冰中缓慢融化,插入冰中 8 分钟内加入目标 DNA,不可在冰中放置时间过长,长 时间存放会降低转化效率。

2、混入目的 DNA 时应轻柔操作。

3、转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。 

 

储存条件: -80℃


用途: 克隆感受态细胞

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