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AO/PI双染细胞凋亡检测试剂盒是采用AO/PI探针双染细胞核的方法检测凋亡细胞的状态,是细胞凋亡形态学研究常用的染色方法。 吖啶橙(Acridine Orange,AO)为一种具有细胞膜通透性的荧光染料,该染料能透过活细胞膜,使核DNA和RNA染色。它与细胞中DNA和RNA结合量存在差别,复合物可发出不同颜色的荧光,AO与dsDNA结合时发出绿色荧光,而与ssDNA和RNA结合时发出红色荧光。当与DNA结合时,它与荧光素在光谱上非常相似,激发最大值为502nm,发射最大值为525nm(绿色)。当它与RNA结合时,激发最大值移至460nm(蓝色),发射最大值移至650nm(红色)。 在荧光显微镜下观察,吖啶橙可透过正常细胞膜,使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光;而在凋亡细胞中,因染色质固缩或断裂为大小不等的片断,形成凋亡小体。吖啶橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光,或黄绿色碎片颗粒;而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。 Propidium Iodide是一种DNA结合性染料,其激发和发射波长分别为488nm和630nm,产生红色荧光,但无膜通透性,不能透过活细胞膜,只能染死细胞。因此,在荧光显微镜下观察,正常细胞不能着色,早期凋亡细胞呈微弱红光,晚期凋亡细胞红光加强,坏死细胞呈强红色荧光。
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