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9N (exo-) DNA聚合酶

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9N (exo-) DNA Polymerase 9N DNA聚合酶中的突变体,具有较强的掺入修饰底物的能力,如:ddNTP、rNTP 和acyNTP,因此其适用于核糖核酸置换法DNA测序、ddNTP或acyNTP的链终止法测序或SNP分析。该酶来源于E. coli菌株,此菌株含有从Thermococcus species 9°N-7 中克隆的经过基因工程改造的9°N (D141A/E143A/A485L) DNA聚合酶基因。

主要特征和应用

  • 提高了修饰核苷酸的掺入能力
  • 部分核糖核酸置换法测定 DNA 序列
  • ddNTP 或 acyNTP 的链终止法用于测序或 SNP 分析

组分

组分名称 数量
9N (exo-) DNA Polymerase (2 U/μl) 250 μl
10×HG PCR Buffer 6 1 ml×2

单位定义

一个活力单位即在在74°C条件下,30分钟内催化10 nmol dNTP的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量。

储存

-20℃可保存3年。

使用方法

按下表配制反应液:
9N (exo-) DNA Polymerase (2 U/μl)            1.25 μl
10×HG PCR Buffer 6                                         5 μl
dNTP Mixture (2.5 mM each)                            2 μl
模板DNA                                                               X
Primers(10 μM)                                   0.25~1 μl
ddH2O                                                   Up to 50 μl
*1模板DNA用量参数(50 μl反应体系):Genomic DNA 100-1000 ng ; Plasmid DNA 5-30 ng ; cDNA from RT reaction 1-5 μl
PCR扩增循环参数 
循环数 温度 时间
1st Cycle 95°C 2min
25-35 Cycles 95°C 20s
Tm 20s
72°C 0.5kb/min
Last Cycle 72°C 2min
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