3173 DNA聚合酶

英文名称：3173 DNA Polymerase
产品编号：A3602
产品类别：核酸扩增/纯化
规格：PCR
检测样本：DNA
存储条件：-20℃
保质期：2年

规格

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500U

￥ 2000 3

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3173 DNA Polymerase为来源于病毒的热稳定型DNA聚合酶，通过点突变修饰，使其3’-5’外切活性缺失（exo-形式）而获得更佳的扩增活性。该酶除了具有依赖于DNA的聚合酶活性，还具有依赖于RNA的逆转录活性，因此可用于单管RT-PCR扩增。该酶具有强烈的链置换活性，可用于DNA或RNA的等温扩增。在以RNA为模板的LAMP实验中，可实现单酶系统反应。对于有复杂二级结构的RNA模板，可通过92度加热3s来得到好的扩增效果，而Bst pol在此温度加热后导致扩增活性丧失。
3173 DNA 聚合酶在95°C条件下的半衰期为20min，因此PCR的起始预变性时间通常为1~2min。该酶搭配两种Buffer：10×3173 Isothermal Buffer和5×Best PCR Buffer。10×3173 Isothermal Buffer用于恒温PCR扩增，其反应温度不能超过70°C。 5×Best PCR Buffer用于常规PCR扩增，94°C预变性时间不可超过5min。

主要特征

同时具有较强的延伸能力和逆转录活性
耐热性能极强，对于复杂模板的扩增活性强
强烈的链置换活性，可应用于LAMP检测

组分

组分名称	数量
3173 DNA Polymerase (5 U/μl)	100 μl
10×3173 Isothermal Buffer	1 ml
5×Best PCR Buffer	1 ml

单位定义

一个活力单位即在65°C条件下，30分钟内催化25nmol dNTP的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量。

应用

恒温PCR扩增
DNA LAMP和RT-LAMP
链置换基因合成
在60-70度之间具有反转录活性，可用于单管RT-PCR

储存

-20℃可保存3年。

使用方法

1.以DNA为模板进行PCR扩增

反应体系配制
3173 DNA Polymerase (5 U/μl)                     1 μl
5×Best PCR Buffer                                    10 μl
dNTP Mixture (2.5 mM each)                        4 μl
模板DNA                                              1ng~1ug
上游引物（10 μM）                                       5 μl
下游引物（10 μM）                                       5 μl
ddH2O                                            Up to 50 ul

PCR扩增循环参数

循环数	温度	时间
1st Cycle	90°C	2min
25-40 Cycles	90°C	15s
	Tm	15s
	72°C	1kb/1min
Last Cycle	72°C	5min

2.以RNA为模板进行RT-PCR扩增

反应体系配制
3173 DNA Polymerase (5 U/μl)                     1 μl
5×Best PCR Buffer                                    25 μl
dNTP Mixture (10 mM each)                        5 μl
模板RNA                                            10ng~1ug
上游引物（10 μM）                                     2 μl
下游引物（10 μM）                                     2 μl
ddH2O                                           Up to 50 ul

PCR扩增循环参数

循环数	温度	时间
1st Cycle	60°C	60min
35 Cycles	90°C	15s
	57°C	15s
	72°C	1kb/1min
Last Cycle	72°C	5min

3.缺刻恒温PCR扩增

3173 DNA Polymerase (5 U/μl)                   1 μl
10×3173 Isothermal Buffer                         5 μl
dNTP Mixture (10 mM each)                      5 μl
模板DNA                                         10ng~1ug
引物（500 μM）                                        5 μl
ddH2O                                           Up to 50 μl
55°C孵育2~8h。