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Klenow Fragment(exo-)

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Klenow片段(3´→5´ exo-)是DNA聚合酶I的N末端截短物,它保留了DNA聚合酶活性,但5´-3´ 核酸外切酶活性缺失。该酶进一步经点突变(D355A,E357A)去除了其 3´-5´的核酸外切酶活性。因此该DNA聚合酶无任何外切酶活性,仅包含了DNA聚合酶活性,广泛用于标记探针制备、cDNA 第二条链的合成等建库试验。

包装

组分名称 数量
Klenow Fragment(exo-) (10 U/μl) 100 μl
*10×Klenow Buffer 1 ml
*10×Klenow Buffer: 500 mM Tris-HCl (pH 8.0 at 25 °C), 50 mM MgCl2, 10 mM DTT. 该酶兼容PCR Buffer和内切酶Buffer。

单位定义

一个活力单位即在37°C条件下,30分钟内催化10 nmol dNTP的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量。

应用

  • 用随机引物制备探针
  • 随机引物法标记
  • cDNA 第二条链的合成
  • 该酶不能用于产物平端不齐

储存

-20°C可保存3年。

失活

75°C,20min失活。
 
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