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Golden MLV反转录酶是海基在鼠源病毒反转录酶基础上进行改良而得的第四代反转录酶,通过定点突变去除了RNase H活性,从而避免反转录过程中降解RNA。同时经过突变文库筛选,使得其热稳定性更强,可耐受55℃高温反应。相比于传统42℃条件下反转录反应,采用55℃反转录可更好地打开RNA二级结构,从而提高复杂RNA模板的扩增性能、提高反转录cDNA的长度和产量,因此能更好地提高后续检测的灵敏度。 | ||||||
组分 | ||||||
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单位定义 | ||||||
以poly(rA)为模板、oligo(dT)为引物,在37°C条件下,10分钟内催化1 nmol的dTTP掺入形成酸不溶性沉淀物所需要的酶量,定义为一个活性单位。 | ||||||
储存 | ||||||
-20°C可保存2年。 | ||||||
反应实例 | ||||||
Fig . 应用Golden MLV Reverse Transcriptase和T公司MLV 反转录酶反转录鸡肌肉组织和人心脏组织总RNA获得cDNA,然后分别扩增500bp、1642bp和1926bp(79%GC含量)的PCR产物。M:DNA Marker 2000 (HaiGene, A0701),泳道1、2、3分别为T公司MLV反转录酶42°C、Golden MLV反转录酶42°C和Golden MLV反转录酶55°C。 |
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