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耐热反转录酶(ThermoStable V Reverse Transcriptase)是在鼠源病毒反转录酶基础上进行定点突变改良而得。该酶去除了RNase H活性中,从而避免反转录过程中降解RNA。同时经过突变文库筛选,使得其热稳定性更强,可耐受65℃高温反应。相比于低温条件下反转录反应,采用高温反转录可显著打开RNA二级结构,从而提高复杂RNA模板的扩增性能、提高反转录cDNA的长度和产量,从而提高后续检测的灵敏度。 | ||||||
组分 | ||||||
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单位定义 | ||||||
以poly(rA)为模板、oligo(dT)为引物,在37°C条件下,10分钟内催化1 nmol的dTTP掺入形成酸不溶性沉淀物所需要的酶量,定义为一个活性单位。 | ||||||
储存 | ||||||
-20°C可保存2年。 | ||||||
反应实例 | ||||||
以人RNA为模板,应用耐热反转录酶和M-MuLV反转录酶分别在50°C、55°C、60°C和65°C进行反转录反应,反应时间为15min,然后进行PCR扩增获得542bp的片段。 | ||||||
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