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| T4 RNA 连接酶1催化3’→5’磷酸二酯键的形成，使核苷酸的5’-磷酸末端和3’-羟基末端连接，伴随着ATP水解为AMP和PPi。T4 RNA 连接酶1的作用底物包括单链RNA、DNA及二核苷焦磷酸，它可催化ssDNA和RNA的连接，相对于ssDNA，该酶对RNA分子的连接和环化效率更高。 |  | ||||||||||
组分 | |||||||||||
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应用 | |||||||||||
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活性定义 | |||||||||||
| 1单位指在1×T4 RNA Ligase Buffer 中，37℃条件下，30分钟内将1nmol的5’-[32P]rA16转化为磷酸盐不溶物质所需要的酶量。 | |||||||||||
储存 | |||||||||||
| -20℃可保存3年。 | |||||||||||
使用注意事项 | |||||||||||
| 1.1× T4 RNA Ligase Buffer：50mM Tris-HCl pH 7.5，10mM MgCl2，1mM DTT。该酶反应时需要加入终浓度1mM ATP。 2. 最佳反应温度37℃，65℃ 10min可使该酶失活。 3. 该酶的连接底物无论是ssDNA还是ssRNA均需要5’-磷酸化或预腺苷化。 4. 该酶不能连接双链DNA或RNA。 5. 加入终浓度5~10% PEG 8000或增加孵育时间可提高连接效率。 | |||||||||||
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