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TRAP染色试剂盒

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仪器准备:1光学显微镜,2.染缸,3.移液器,4.秒表,5.冰盒,6.载玻片,7.吸头,8.一次性手套,9.纯水

使用方法: 

注意:所有的工作液请使用前新鲜配制,配制后立即使用,一次使用完,不可放置。

样本的染色处理:
一、血涂片及骨髓涂片
1、推片:
取全血或骨髓3ul左右置载玻片上,将推玻片保持与载玻片30°角,置于血滴正前方,稍微往后移与血滴接触,血滴沿推片下缘散开,再匀速沿载玻片平面平稳向前滑动,至血滴铺完血膜为止。不要太薄,以免细胞太少,也不要太厚,以免太重叠。
2、固定:
让涂片在空气中自然晾干,再放入本试剂盒中的固定液A中固定2-3分钟,水洗30-60秒。
3、孵育:
水洗后还未完全干前放入底物孵育液中避光孵育60分钟。太干后染色效果会变差。
4、复染:
孵育完后,取出水洗1分钟,在玻片未完全干前进行复染。可用苏木素复染1-2分钟,或者用甲基绿复染2-3分钟,两者任选其一即可。

二、细胞涂片及细胞爬片
1、固定:
将细胞涂片或细胞爬片放入本试剂盒中的固定液A中固定2-3分钟,水洗30-60秒。
2、孵育:
水洗后还未完全干前放入底物孵育液中避光孵育60分钟。太干后染色效果会变差。
3、复染:
孵育完后,取出水洗1分钟,在玻片未完全干前进行复染。可用苏木素复染1-2分钟,或者用甲基绿复染2-3分钟,两者任选其一即可。

三、冰冻切片
1、回温:
将保存在-20℃冰箱中的冰冻切片放置到切片架上回温5-10分钟。可以放在37℃孵箱中进行回温,或者将切片架放置在一个小盒子中,将盒子置于37℃水浴锅中进行回温。
2、水合:
将回温好的切片,水中浸泡1-2分钟。
3、固定:
让切片在空气中自然晾干,再放入本试剂盒中的固定液中固定2-3分钟,水洗30-60秒。
4、孵育:
水洗后还未完全干前放入底物孵育液中避光孵育60分钟。太干后染色效果会变差。
5、复染:
孵育完后,取出水洗1分钟,在玻片未完全干前进行复染。可用苏木素复染1-2分钟,或者用甲基绿复染2-3分钟,两者任选其一即可。

四、石蜡切片
1、脱蜡:
二甲苯中脱蜡5-10分钟。再换用新鲜的二甲苯脱蜡5-10分钟。
2、浸泡:
无水乙醇浸泡5分钟。再分别用90%、70%乙醇各2分钟。
3、水合:
蒸馏水中浸泡2分钟。
4、孵育:
还未完全干前放入底物孵育液中避光孵育60分钟。太干后染色效果会变差。
5、复染:
孵育完后,取出水洗1分钟,在玻片未完全干前进行复染。可用苏木素复染1-2分钟,或者用甲基绿复染2-3分钟,两者任选其一即可。

结果分析:
阳性反应为鲜红色或深红色颗粒,定位于胞浆中。
 
注意事项:
1.TRAP孵育液易失效,本法宜用皮肤穿刺血涂片,晾干后应及时染色;
2.对冰冻切片染色时,应减少切片在室温暴露的时间。
3.样本需新鲜,取材后应立即处理,否则会影响酶的活性。
4.组织固定需在4℃冰箱进行,时间不宜超过24h,否则酶活性会减弱或消失。
5.一般不建议用石蜡切片。如果需要用石蜡切片,组织在石蜡包埋时,温度不宜高于56℃。应使用熔点为52~54℃的石蜡进行浸蜡,浸蜡时间要短,否则酶活性会减弱或消失。
6.石蜡切片不需要固定。
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