试验前请仔细阅读说明书，本产品仅供科研实验使用。
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1、已超过受理期限的产品，如过保质期。
2、由于客户自身操作原因导致实验失败。
3、由于客户没有仔细确认要订购的指标，导致自己的指标定错。
4、产品已使用（质量问题除外）。
产品概述 product description
巯基检测试剂盒是利用经典的Ellman法进行总巯基检测的试剂盒。试剂盒准确性高，重复性和抗干扰性强，使用方便，可用于测各种动物的血清/血浆、组织、细胞、培养液以及植物组织样本等。 Ellman试剂是一种通用的水溶性化合物，用于定量溶液中的游离巯基。该化合物的溶液在与巯基反应时会产生可测量的黄色产物。因此，Ellman试剂非常适合用作巯基测定试剂，因为它在反应缓冲液中对-SH基团具有特异性，摩尔消光系数高且反应时间短。 本试剂盒用于各种样品中的游离巯基，如果需要还原所有二硫键，测定总半胱氨酸巯基，。 生物体内活性巯基（SH）主要包括谷胱甘肽巯基和蛋白质巯基。谷胱甘肽巯基能够修复氧化损伤的蛋白质，参与活性氧清除。蛋白质巯基主要存在于半胱氨酸，是蛋白质结构和生物体内某些氧化还原反应重要基团，在蛋白质结构中两个巯基脱氢而形成的二硫键，使相邻多肽得以连接．对于维持蛋白质完整结构作用十分重要。 巯基还是很多酶的活性基团，一些重金属盐如Hg2+等与酶巯基结合，影响酶活性。巯基化合物与机体许多机能活动，药物及毒物的作用以及某些疾病的发生发展有着密切关系。 所有动物组织都含有不同量的活性巯基，测定组织和血液中巯基含量已日益为人们所重视,以期探索对某些疾病的发生机理、治疗、预防以及预后判断等方面的研究意义。 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。 可以为您提供各种颜色的M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品，以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。 可以提供动物、植物、微生物、酵母、水产、家禽、兽类、土壤等样本的各种生化指标检测的数百种试剂盒产品。
保存温度
2-8℃ 避光
注意事项
开盖后组份按要求条件保存。
有效期
6个月
检测方法
分光光度计
适用样本
血清、血浆、尿液、细胞培养上清、细胞裂解液、组织裂解液
产品应用
分光光度计
仪器准备
1.分光光度计
2.恒温水浴锅
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
2.恒温水浴锅
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
试剂准备
1.生理盐水
2.纯水
2.纯水
耗材准备
1.比色皿
2.试管
3.吸头
4.一次性手套
2.试管
3.吸头
4.一次性手套
使用注意事项
1.试剂B2干粉开盖使用前先敲入瓶底部，防止开盖时洒落导致损失。
2.测定复杂蛋白质样品时，如果需要将内部巯基完全暴露，可以用盐酸胍变性剂处理需要测定的蛋白质样品，有助于将内部巯基完全暴露。不推荐将尿素用作变性剂，因为它会形成与巯基发生反应的氰酸盐。
3.如果需要还原待测蛋白质样品的二硫键，测定所有的二硫键巯基，可以使用DTT或β-巯基乙醇 （BME，2-ME）还原剂处理待测蛋白样品，但是注意一定要完全去除还原剂DTT和β-巯基乙醇，因为它们会引入巯基。可以采用透析或脱盐的方法去除还原剂DTT和β-巯基乙醇。
注意避免还原分子的样品损失，尽可能完全回收还原蛋白质/肽。
在还原过程中，向样品缓冲液中加入 5-20 mM EDTA 有助于防止二价金属（如 Zn2+、Cu2+ 和 Mg2+）对巯基进行再氧化。
4.还原样品应在还原后立即进行测定，因为二硫化物会随时间重新形成。
2.测定复杂蛋白质样品时，如果需要将内部巯基完全暴露，可以用盐酸胍变性剂处理需要测定的蛋白质样品，有助于将内部巯基完全暴露。不推荐将尿素用作变性剂，因为它会形成与巯基发生反应的氰酸盐。
3.如果需要还原待测蛋白质样品的二硫键，测定所有的二硫键巯基，可以使用DTT或β-巯基乙醇 （BME，2-ME）还原剂处理待测蛋白样品，但是注意一定要完全去除还原剂DTT和β-巯基乙醇，因为它们会引入巯基。可以采用透析或脱盐的方法去除还原剂DTT和β-巯基乙醇。
注意避免还原分子的样品损失，尽可能完全回收还原蛋白质/肽。
在还原过程中，向样品缓冲液中加入 5-20 mM EDTA 有助于防止二价金属（如 Zn2+、Cu2+ 和 Mg2+）对巯基进行再氧化。
4.还原样品应在还原后立即进行测定，因为二硫化物会随时间重新形成。
使用方法
1. 试剂配制：
使用前，准确吸取10 ml试剂B1加入试剂B2干粉，充分溶解混匀，即成ELLMAN试剂B工作液，4℃避光保存。
2. 样本处理
血清/培养液等液体样本：直接检测或稀释后检测。
蛋白质粉末：用水溶解后检测。
动物、植物细胞组织：按照组织质量（g）：生理盐水或PBS体积(mL)为1：5-10 的比例（建议称取约100 mg 组织，加入1 mL 生理盐水或PBS等缓冲液）进行冰浴匀浆，然后8000×g，4℃离心15 min，取上清，置冰上待测。
3. 总巯基的测定
按下表在试管中加入试剂。
同时做空白管（无样品液）、样品对照管（无ELLMAN试剂）。
充分混匀，置室温静置15分钟。
在412 nm，0.5 cm光径，以反应缓冲液试剂A调零。
测定各管OD值：A测定、A空白、A对照。
【注】：
如果OD值太大，可以将样品用试剂A稀释后再检测。
空白管做一个即可。
对照管最好每个样品均做，如果样品本身的背景值较低，也可以只做一个。
4. 计算
血清中总巯基含量（mmol/L）
=（A测定 - A空白 - A对照）÷14.15÷0.5×10
【注】：
以上以0.5 cm光径检测设备为例，如果实际使用的检测设备是采用1 cm光径，将计算公式中的0.5换成1即可。
如果样品进行了稀释，计算时注意乘上相应的稀释倍数。
组织细胞中总巯基含量（mmol/g）
=（A测定 - A空白 - A对照）÷14.15÷0.5×10÷蛋白含量（g/L）
【注】：
以上以0.5 cm光径检测设备为例，如果实际使用的检测设备是采用1cm光径，将计算公式中的0.5换成1即可。
【注】：
14.15为毫摩尔消光系数14.15 / mM •cm；14.15 mM-1•cm-1
0.5为光径0.5 cm；
10为反应总体积/样品取样量
使用前，准确吸取10 ml试剂B1加入试剂B2干粉，充分溶解混匀，即成ELLMAN试剂B工作液，4℃避光保存。
2. 样本处理
血清/培养液等液体样本：直接检测或稀释后检测。
蛋白质粉末：用水溶解后检测。
动物、植物细胞组织：按照组织质量（g）：生理盐水或PBS体积(mL)为1：5-10 的比例（建议称取约100 mg 组织，加入1 mL 生理盐水或PBS等缓冲液）进行冰浴匀浆，然后8000×g，4℃离心15 min，取上清，置冰上待测。
3. 总巯基的测定
按下表在试管中加入试剂。
同时做空白管（无样品液）、样品对照管（无ELLMAN试剂）。
充分混匀，置室温静置15分钟。
在412 nm，0.5 cm光径，以反应缓冲液试剂A调零。
测定各管OD值：A测定、A空白、A对照。
【注】：
如果OD值太大，可以将样品用试剂A稀释后再检测。
空白管做一个即可。
对照管最好每个样品均做，如果样品本身的背景值较低，也可以只做一个。
4. 计算
血清中总巯基含量（mmol/L）
=（A测定 - A空白 - A对照）÷14.15÷0.5×10
【注】：
以上以0.5 cm光径检测设备为例，如果实际使用的检测设备是采用1 cm光径，将计算公式中的0.5换成1即可。
如果样品进行了稀释，计算时注意乘上相应的稀释倍数。
组织细胞中总巯基含量（mmol/g）
=（A测定 - A空白 - A对照）÷14.15÷0.5×10÷蛋白含量（g/L）
【注】：
以上以0.5 cm光径检测设备为例，如果实际使用的检测设备是采用1cm光径，将计算公式中的0.5换成1即可。
【注】：
14.15为毫摩尔消光系数14.15 / mM •cm；14.15 mM-1•cm-1
0.5为光径0.5 cm；
10为反应总体积/样品取样量
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