SFM ( 500ml ) ， L-glutamine ( 2MM final ) ， 5ml Pen Strep ( 10 ， 000 U / ml )
细胞收到后处理
半贴壁、半悬浮细胞处理方法：
1、该细胞是半贴壁半悬浮生长，悬浮细胞用离心管收集细胞悬液，1000rpm 离心 5min，收 集上清（后期对比培养使用）。
2、当未超过 80%汇合度时，将离心收集到的悬浮细胞沉淀加入 5ml 完全培养基重悬，加入 原培养瓶中，放入 37℃、5%CO2 孵箱培养。
3、超过 80%汇合度时，将贴壁细胞根据贴壁细胞传代方法消化、离心、收集；将悬浮细胞 和贴壁细胞的沉淀用 1-2ml 完全培养基重悬收集到一起，混匀后，按 1:2 进行分瓶传代（2 个 T25）。
（传代时建议一瓶用原瓶里面的完全培养基，另外一瓶用自己配的完全培养基， 进行对比培养。） （注意：如收到密封培养瓶，处理完后放入培养箱培养时要将培养瓶盖子拧松）
冻存细胞到货处理
1、收到细胞后，检查外包装情况和箱内是否还有干冰。如有外包装破损干冰已完全挥发等 问题，请即时联系。
2、将细胞取出转移至液氮或－80 度冰箱保存，建议尽早复苏。
3、复苏第一管如有活性状态问题及时与我们联系，会有技术人员与您沟通指导后再复苏第 二管。特别说明：未与我方联系擅自复苏第二管出现问题不予售后。
细胞复苏
1、 从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入 37℃水浴中解冻， 直至冻存管中无结晶，然后用 75%的酒精擦拭冻存管外壁；
2、将冻存管中的细胞移至含 5ml 完全培养基的 15ml 离心管中，1000rpm 离心 5min；
3、弃上清，沉淀用 5ml 完全培养基重悬，接种 T25 培养瓶，于 37℃,5%CO2 细胞培养箱中 培养；
4、第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。
细胞传代 1、细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，收集 T25 培养瓶中的悬浮细胞培养液，1000rpm 离心 5min；
2、贴壁细胞用 PBS 清洗一次，添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜 下观察，待细胞回缩变圆后加入 5ml 完全培养基终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后 将悬液转移至 15ml 离心管中，1000rpm 离心 5min；
3、弃上清，将悬浮细胞和贴壁细胞的沉淀用 1-2ml 完全培养基重悬收集到一起，混匀后， 按 1:2 进行分瓶传代（2 个 T25）。补充新的完全培养基至 5-8ml/瓶，最后放入 37℃,5%CO2 细胞培养箱中培养；
细胞冻存
1、细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，收集 T25 培养瓶中的悬浮细胞培养液，1000rpm 离心 5min；
2、用 PBS 清洗细胞一次，添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观 察，待细胞回缩变圆后加入 5ml 完全培养基终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬 液转移至 15ml 离心管中，1000rpm 离心 5min；
3、 弃上清，将悬浮细胞和贴壁细胞沉淀加入 1ml/支的雅吉无血清冻存液（7001），重 悬收集到一起，混匀后加入冻存管中。（如：冻一支，加入 1ml 无血清冻存液）
4、 将冻存细胞直接放入－80℃冰箱即可；如后期要将细胞转入液氮罐中，需在-80℃冰箱 存放 24 小时以上。
