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新鲜/冷冻组织单细胞悬液分离试剂盒

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描述:

从新鲜和/或冷冻组织中获得优质细胞悬浮液是后续实验的重要步骤,如流式细胞术分析  (FACS)和核酸纯化。细胞悬浮液可以通过以下一种或三种方法从组织中分离出来:化学组织分  离、酶消化和物理分离。许多方法都过于繁琐和费时。最重要的是 ,组织中尤其是冷冻组织中 的细胞,通常被破坏,表现出低完整性和低活性。很难从结缔组织含量较高的冷冻样品中获取 得高活性的细胞悬液,例如肝、肾、脑组织等。我们开发的这款试剂盒,简单、快速、高效、 无需特殊仪器,利用化学和物理分离机制将细胞从新鲜或冷冻的组织中分离出来。该试剂盒可

在20分钟内完成,可获得具有较高完整性和活性的细胞悬液。

应用:

用该试剂盒获得的细胞悬液可以用于 FACS 分析和其他应用。

试剂盒组分(50T):

1.  组织分离液                    15ml

2. 1.5ml 离心管                  50 个

3. 1.5ml 离心管的研磨杵   2 个

储存:  常温运输,  4 度储存。

所需附加材料

台式离心机

FACS 缓冲液  (1XPBS 中加入 5%牛血清白蛋白,   0.01%叠氮化钠)

40- 100um 的细胞筛选


操作方法:     (将组织分离液和 FACS 缓冲液冰上预冷)

1.    取10-30毫克的组织置于试剂盒提供的1.5 ml离心管中。加入200μl预冷的组织分离液覆盖组织,冰上孵育5- 10分钟。使用提供的研磨杵反复扭转研磨组织100 – 200次(这个过程大约 2-3分钟)。研磨杵可重复使用,用清水清洁后,用纸巾擦干即可。不建议使用自备的     1.5ml离心管,因为其他的1.5ml离心管和试剂盒提供的研磨杵可能不匹配。

2.    研磨后,   500Xg,离心3分钟,弃去上清液。用研磨杵将沉淀扭转研磨100- 150次。研磨杵放在管中,加入1ml的FACS缓冲液,将样品再研磨几次重悬。如前所述清洁并擦干研磨 杵,以供将来使用。

3.    用1ml的吸头上下吹打10 – 20次重悬细胞。将细胞悬液过40 - 100μm细胞筛(细胞筛的孔径根据最终所需细胞大小选择)。用低速离心(500Xg, 3min)收集细胞,再用适量的FACS缓冲 液重悬细胞。    不要使用PBS重悬细胞,因为细胞非常脆弱。如果细胞不在FACS缓冲液或  其他含血清的缓冲液(例如:含有10- 20%胎牛血清的组织培养基)中重悬,细胞的活力将 受到显著影响。

 

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